【摘 要】目的:探讨冠心病(coronary heart disease,CHD)患者焦虑情绪与载脂蛋白 E(ApoE)基因多态性的关系。方法:对符合1979年世界卫生组织CHD诊断标准的107例冠心病患者,进行汉密顿焦虑量表(HamiltonAnxiety Scale,HAMA)、焦虑自评量表(Self-Rating Anxiety Scale,SAS)测评,依焦虑评分情况将患者分为CHD伴焦虑组(焦虑组)、CHD不伴焦虑组(无焦虑组),选择53例健康人为对照组。于入院2日内留存血样,以Hhal限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳确定ApoE基因多态性,采用生物化学方法测定血清血脂。结果:焦虑组ε4等位基因频率高于无焦虑组和对照组(26.0% vs.10.4%,26.0% vs.13.6%;P=0.021,0.004)。焦虑组E4/4基因型频数高于无焦虑组(4 vs.0,P=0.032)。焦虑组E3/4基因型频数高于对照组(17 vs.8,P=0.018)。无焦虑组ε4等位基因频率高于对照组,但差异无统计学意义(13.6% vs.10.4%,P=0.802)。CHD组携带ε4等位基因患者HAMA[(13.2±5.2)vs.(9.2±6.5)]、SAS评分[(42.3±7.7)vs.(37.1±8.3)]及总胆固醇[(5.4±1.1)mmol/L vs.(4.8±1.3)mmol/L]、低密度脂蛋白水平[(3.6±1.0)mmol/L vs.(3.1±1.1)mmol/L]均高于非携带ε4等位基因者(P 1.2.6PCR限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)
Hhal反应体系: PCR 反应体系10 μL,10×Buffer 2 μL,Hhal 1μL,加去离子水至20 μL,温和震荡,短暂离心数秒。37℃酶切4 h,然后取10L酶切产物用4%NuSieve3∶1琼脂糖凝胶电泳。
ApoE基因PCR扩增产物的酶切结果的判断: 本研究借助限制性核酸内切酶Hhal对ApoE基因PCR扩增产物的两个多态性位点(112位和158位氨基酸残基)进行酶切,进而运用RFLP技术对酶切产物进行分析。由于酶切位点不同,故ApoE基因PCR扩增产物经限制性核酸内切酶Hhal作用后可产生6个大小不同的片段,分别为91bp、831p、61bp、72bp、48bp和35bp。6个片段不同的组合构成不同的ApoE基因型:E2/2,91bp、83bp、61bp;E2/3,91bp、83bp、61bp、48bp、35bp; E3/3,91bp、48bp、35bp; E2/4,91bp、83bp、72bp、61bp、48bp、35bp; E3/4,91bp、72bp、61bp、48bp、35bp;E4/4,72bP、61bp、48bp、35bp。
ApoE基因PCR扩增产物的酶切结果见图1。
1.2.7 统计方法
应用SPSS11.0统计软件进行资料分析,所有计量数据均以均数±标准差(x±s)表示。ApoE基因型构成及等位基因频率在不同人群中分布的比较采用χ?2检验;均数间的比较用t检验,采用拟合优度卡方检验计算基因型分布是否符合Hardy-Weinberg(H-W)平衡,)采用平衡法计算等位基因的频率。
2 结 果
2.1Hardy-Weinberg遗传平衡检验
根据Hardy-Weinberg定律,算出各基因型的理论值,经拟合卡方检验基因型频率实测值与理论值之间差异无统计学意义(CHD组χ?2=7.801,P=0.168;对照组χ?2=0.808,P=0.977),CHD组和对照组的基因型均符合Hardy-Weinbeg遗传平衡,说明资料有群体代表性(表1)。
2.2三组ApoE基因型分布及等位基因频率的比较
焦虑组ε4等位基因频率明显高于对照组(χ?2=8.440,P=0.004),也明显高于无焦虑组(χ?2=5.325,P=0.021)。焦虑组ε4/4基因型频数明显高于无焦虑组(χ?2=4.599,P=0.032)。焦虑组E3/4基因型频数明显高于对照组(χ?2=5.585,P=0.018)。其他各基因型频数和等位基因频率在各组的分布差异无统计学意义。无焦虑组ε4等位基因频率高于对照组,但差异无统计学意义(表2)。
2.3携带ε4等位基因与不携带ε4等位基因CHD患者的量表总分和血脂水平比较
携带ε4等位基因的CHD患者HAMA、SAS评分及总胆固醇、低密度脂蛋白水平均高于非携带ε4等位基因者,差异有统计学意义(P [6]张作记.焦虑的基本问题及临床处理?[J].中国行为医学科学,2004,13(2):238-240.
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编辑:赵志宇
20009-10-19收稿,2009-12-01录用