篇一：双歧杆菌
药物名称：双歧杆菌 药物别名：丽珠肠乐Bifidobiogen-Livzon 英文名称：bifidobacteria 说 明：胶囊。于阴凉处密封保存。有效期1年。 功用作用：各种原因所致肠菌群失调疾病，如急慢性肠炎、腹泻、便秘等肠功能紊乱的防治，以及菌群失调所致血内毒素升高，如急慢性肝炎、肝硬化、肝癌等的辅助治疗。 用法用量：成人1-2粒/次，早晚各1次，餐后口服。儿童剂量酌减，重症加倍。婴幼儿可取出胶囊内药粉用凉开水调服。
篇二：双歧杆菌国标
食品安全国家标准 食品微生物学检验 双歧杆菌的鉴定
前言
本标准代替 GB/T 4789.34-2008《食品卫生微生物学检验?双歧杆菌检验》。 本标准与 GB/T 4789.34-2008 相比，主要变化如下：
——修改了标准的中文名称；
——修改了培养基和试剂；
——删除了果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶（F6PPK）测定和双歧杆菌的计数方法。 食品安全国家标准
食品微生物学检验 双歧杆菌检验
1 范围
本标准规定了食品中双歧杆菌（Bifidobacterium ?）的鉴定方法。 本标准适用于食品中双歧杆菌的鉴定。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a） 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃；
b）气相色谱仪配 FID 检测器；
c） 冰箱：2 ℃～5 ℃；
d）天平： 感量 0.1 g；
e）无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm；
f） 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器（200 μL～1000 μL） 及配套吸头；
g）无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
3 培养基和试剂
3.1 双歧杆菌培养基：见附录 A 中的 A.1。
3.2 PYG 液体培养基：见附录 A 中的 A.2。
3.3 甲醇：分析纯。
3.4 三氯甲烷：分析纯。
3.5 硫酸：分析纯（体积比）。
3.6 冰乙酸：分析纯（体积比）。
3.7 乳酸：分析纯。
3.8 乙酸标准溶液：吸取分析纯冰乙酸5.7 mL，移入100 mL容量瓶中，加水至刻度，标定，标定方法见附 录B，此溶液浓度约为1 mol/L。
3.9 乙酸标准使用液：将经标定的乙酸标准溶液用水稀释至0.01 mol/L。
3.10 乳酸标准溶液：吸取分析纯乳酸8.4? mL，移入100? mL容量瓶中，加水至刻度，标定，标定方法见附 录B，此溶液浓度约为1 mol/L。
3.11 乳酸标准使用液：将经标定的乳酸标准溶液用水稀释至
0.01 mol/L。 4 检验程序
双歧杆菌鉴定程序见图 1。
5 操作步骤
5.1样品制备
5.1.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
5.1.2 以无菌操作称取 25 g（mL）样品，置于装有 225 mL 生理盐水的灭菌锥形瓶内，制成 1:10 的样品匀液
5.2 稀释及涂布培养步骤
5.2.1 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1.0 mL，沿管壁缓慢注于装有 9 mL 生理盐水的 无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制 成 1:100 的样品匀液。
5.2.2 另取 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸头，按 5.2.1 操作顺序，做 10 倍
递增样品匀液，每递增稀释一 次，即换用 1 次 1 mL 灭菌吸管或吸头。
5.2.3 根据待鉴定菌种的活菌数，选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取 0.1 mL 稀释液，用 L 棒 在双歧杆菌琼脂平板进行表面涂布,每个稀释度作两个平皿。置 36 ℃±1 ℃温箱内培养 48 h±2 h，培养后 选取单个菌落进行纯培养。
5.3 纯培养
挑取 3 个或以上的菌落接种于双歧杆菌琼脂平板，厌氧，36 ℃±1 ℃培养 48 h。
5.4 镜检及生化鉴定
5.4.1 涂片镜检
双歧杆菌菌体为革兰氏染色阳性，不抗酸、无芽孢，无动力，菌体形态多样，呈短杆状、纤细杆状或 球形，可形成各种分支或分叉形态。
5.4.2 生化鉴定
过氧化氢酶试验为阴性。选取纯培养平板上的三个单个菌落，分别进行生化反应检测，不同双歧杆菌 菌种主要生化反应见附录B。
5.5 有机酸代谢产物测定
气相色谱法测定双歧杆菌的有机酸代谢产物, 见附录 C。
6 报告
根据镜检及生化鉴定的结果（5.4）、双歧杆菌的有机酸代谢产物乙酸与乳酸微摩尔之比大于 1（5.5），
报告双歧杆菌属的种名。
篇三：双歧杆菌的作用及应用
双歧杆菌的作用及应用
系 部：专业班级：姓 名：指导老师：时 间：
目录
摘 要??????????????????????????1 关键词??????????????????????????1 前 言??????????????????????????1 1双歧杆菌生物学性状??????????????????1 2双歧杆菌的形态及生理生化特征 ?????????????1 3双歧杆菌的分布及类型 ?????????????????2 4双歧杆菌生理作用 ???????????????????2
4．1屏障作用??????????????????????2
4．2营养作用??????????????????????2
4．3抗肿瘤作用?????????????????????3
4．4免疫作用??????????????????????3
4．5控制内毒素血症的作用????????????????3
4．6延缓衰老作用????????????????????3 5 双歧杆菌的应用?????????????????????4
5.1双歧杆菌在药品中的应用???????????????4
5.2双歧杆菌因子的应用??????????????????4
5.3双歧杆菌在营养液中的应用??????????????4
5.4双歧杆菌在酸奶中的应用???????????????4
5．5双歧杆菌在新剂型中的应用???????????????5 小结???????????????????????????5 参考文献?????????????????????????6 致谢???????????????????????????7
摘要： 双歧杆菌作为人类肠道菌群的重要成员，在人体保健与疾病防治方面的作用引人瞩目。近年来对双歧杆菌的生物学作用进行了深入的研究，并在保健品及药品等方面进行着广泛的开发。
关键词： 双歧杆菌 生物学作用 应用
前 言
1899年，Tisser首先由母乳营养儿的粪便中分离一种厌氧的革兰阳性杆菌，菌体轻度弯曲，末端常见分叉，故名双歧杆菌。在20世纪初，曾试图用双歧杆菌肉汤培养物移植到数量较少的婴儿肠道中，用以提高婴儿对肠道疾病的抵抗力。20世纪50年代后，多次国际会议讨论双歧杆菌对机体的有益作用，对其生理意义的认识不断深入，在用于预防和治疗微生态失调及某些疾病中取得了一定成绩，双歧杆菌引起国际上广泛关注。20世纪60年代后，我国开始了这一领域的研究，试图利用双歧杆菌等微生态制剂达到有病治病、未病防病、无病保健三重效应，展现出了可喜前景。
1 双歧杆菌生物学性状
双歧杆菌（Bifidobacterium）为G+菌，不形成芽孢和荚膜，也无动力，抗酸染色阴性。菌体略弯曲，末端呈分叉状。多形性是本菌属的一个重要特征，形状多样性的呈现可能 由某些碳酸盐所诱发，或与缺乏氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、醋酸钠以及N-乙酰氨基糖有关。一般认为多形性是细菌对环境不太适应的结果。
双歧杆菌为厌氧菌，但不同菌种对氧的敏感性有差异，某些菌种当有CO2存在时，对氧可以耐受。不同种类的双歧杆菌对糖的发酵能力不同，产酸不产气。触酶试验多为阳性，多数能分解尿素，不产生靛基质和硫化氢。无内、外毒素。
双歧杆菌一般对卡那霉素、新霉素、链霉素、多粘菌素、庆大霉素、灭滴灵等耐受。对夹竹桃霉素、林可霉素、万古霉素、青霉素G、氨苄青霉素、红霉素、呋喃坦啶敏感。 双歧杆菌属于丙酸杆菌科，共有11个种、30个亚种和型，如分叉双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌等。
双歧杆菌具有多种生理功能，是目前公认的益生菌，只有齿双歧杆菌与龃齿形成和牙周炎有关，但其致病作用仍不明确
2 双歧杆菌的形态及生理生化特征
双歧杆菌是革兰氏阳性多形态杆菌，呈Y字形、V字形、弯曲状、刮勺状等形态，其典型的特征是有分叉的杆菌，因而取名为bifidus，拉丁语源是裂开、分开之意。双歧杆菌不形成芽孢，亚甲兰染色菌体着色不规则，无运动性，专性厌氧，过氧化酶阴性，不还原硝酸盐，吲哚反应阴性，明胶液化阴性，联苯胺反应阴性；最适生长温度37～41℃，最适发酵温度35～ 40℃，最低生长温度25～28℃，最高生长温度43～45℃；起始生长
pH值为6.7～7.0，在 pH值为4.5～5.0以下或pH值为8.0～8.5以上的环境中都不生长。双歧杆菌对糖类碳水化 合物的分解代谢途径不同于乳酸菌的同型或异型发酵，而是经由特殊的双歧支路，其中果糖 -6-磷酸酮酶是其关键性的酶。对葡萄糖代谢是按果糖-6-磷酸酮酶途径水解，最后生成乙酸 和乳酸，二者摩尔比为1.5∶1，不生成CO2、丁酸、丙酸；DNA碱基组成摩尔百分比为57 ～68。
3 双歧杆菌的分类及分布特点
双歧杆菌归于放线菌科双歧杆菌属（Bifi-dobacterium Orla－Jensen 1924，472），广泛存在于人和多种动物肠道内，有部分菌种还存在于人类阴道和口腔。存在于人体内的双歧杆菌菌种有青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌等。目前认为，双歧杆菌均无致病性，对人有益无害。双歧杆菌是人体的重要生理菌群，对维持人体微生态平衡起重要作用。双歧杆菌在婴儿出生后两天内即进入肠道定植，终生存在于人体内，对维持人体重要生理功能如儿童生长发育、食物的消化吸收、生物拮抗作用、免疫功能均有十分重要的作用。 4 双歧杆菌生理作用
在肠道众多的细菌中，数量最大的当属双歧杆菌，它是既不产生内、外毒素，也不产生致病物质和有害气体的益生菌。机体为双歧杆菌的定植提供了诸多有利条件，而双歧杆菌在肠道中成为优势菌群，这对维护机体的健康具有重要意义。
4．1屏障作用
双歧杆菌通过磷壁酸与肠黏膜上皮细胞紧密结合，与其他厌氧菌一起共同占据肠黏膜表面，形成生物屏障，构成肠道的定植抗力，阻止致病菌、条件致病菌的定植和入侵。双歧杆菌在维持正常的肠蠕动方面也有重要作用，正常肠蠕动是阻止和排除致病菌在肠道中定植的一个重要手段。无菌动物肠道蠕动、运送和排空能力均较弱，而普通动物肠道中，由于双歧杆菌等专性厌氧菌产酸，肠腔内处于酸性环境，EH较低，具有调节肠蠕动、维护生理功能的作用。
新生儿早期肠道细菌移位现象具有普遍性和一过性，与新生儿肠道微生态平衡的建立、肠黏膜发育状况及免疫功能密切关系。Duffy等发现添加双歧杆菌制剂的乳鼠不发生细菌移位，Locascio等也证明口服双歧杆菌制剂的新生鼠，其细菌移位率明显下降，表明双歧杆菌等正常菌群具有生物屏障作用，抑制细菌移位现象的发生，降低新生儿早期感染性疾病的发生率和死亡率。建议对早产儿、剖宫产儿母乳不足或人工喂养儿，生后可适量口服活菌制剂，帮助其肠道菌群平衡的建立，发挥屏障作用。
4．2营养作用
双歧杆菌可以合成多种维生素，如硫胺素、尼克酸、吡哆醇、泛酸、叶酸、维生素B12等。当肠道菌群失调时，明显表现出维生素缺乏，证实双歧杆菌的正常菌群为机体提
供维生素的重要意义。双歧杆菌对某些营养物的吸收具有促进作用，因该菌和其他厌氧菌产生的酸使环境中的pH和EH下降，从而有利于二价铁、维生素D及钙的吸收。
4．3抗肿瘤作用
将大肠埃希菌、粪链球菌及副腐败梭菌接种无菌小鼠，致使100%的小鼠发生肝肿瘤。若将上述菌株与长双歧杆菌一起给予无菌小鼠后，则使肝肿瘤发生率由100%下降到46%。该实验表明，肠道内某些细菌可以产生致癌因子，而另外一些细菌如双歧杆菌可能具有清除这些致癌因子的作用。康白（1987）报道青春双歧杆菌DM8504对小鼠H22肿瘤有抑制作用，对小鼠艾氏腹水癌有抗癌活性。将H22癌细胞接种小鼠，于2天后经尾静脉注射一定量青春双歧杆菌DM8504活菌，每天1次，连续5天，对照组注射生理盐水。自接种癌细胞后10天处死，测平均肿瘤重量，实验组与对照组差异有非常显著性。Sekine证实，加热杀死的婴儿双歧杆菌的细胞壁具有抗肿瘤活性，作用的强弱与细胞的完整性有关。抗肿瘤的机制是细胞通过激活吞噬细胞的吞噬活性，而不具有直接的细胞毒作用。
4．4免疫作用
利用青春双歧杆菌DM8504菌液（30亿/ml）给小鼠注射，每天1次，连续3天，为实验组。以同样方法注射灭活的大肠埃希菌液（30亿/ml）作为对照组。免疫后5天测定吞噬细胞对鸡红细胞的吞噬率、吞噬指数和脾脏指数。结果表明，双歧杆菌活性对巨噬细胞有明显的激活作用。此外，通过无菌动物和正常动物的比较，无菌动物的淋巴结和免疫细胞的发育数量均低于正常动物，从而间接表明，双歧杆菌等正常菌群的定植相当于自然自动免疫，有助于免疫系统的发育。
4．5控制内毒素血症的作用
发现小白鼠因放射线引起肠道菌群失调，表现为双歧杆菌减少、肠道杆菌等增加，并从被照射的动物和组织中检出了脂多糖。内毒素血症的形成是由于膜菌群的双歧杆菌的减少，导致肠道杆菌在肠黏膜大量定植、增生释放内毒素入血。有人以大肠埃希菌、肺炎克氏菌、铜绿假单胞菌和变形杆菌的混合菌液灌服大白鼠。通过鲎试验证明已诱发内毒素血症。再用双歧杆菌DM8504活菌液灌胃治疗后，鲎试验为阴性，双歧杆菌数量增加，肠道革兰阴性杆菌也降到正常水平。而未经过治疗动物的鲎试验仍为阳性。
4．6延缓衰老作用
有关抗衰老学说众多，比较公认的有十几种，其中自身中毒学说、自由基学说、免疫与衰老相关学说等均与肠道微生态环境有关。大肠中毒学说认为肠道内发酵后食物残渣及腐败菌可产生胺类、硫化氢、吲哚等有毒物质与毒素，这些物质对器官、组织及神经细胞造成损害可引起功能障碍，导致衰老。而肠道内双歧杆菌通过其屏障与清扫作用，可减少有毒物质与毒素的产生与吸收，有利于脏器功能的正常发挥及延缓衰老的过程。双歧杆菌不仅抑制致病菌的生长，阻止它们的入侵，维持肠道菌群平衡，而且还具有清除肠道内腐败物质与毒素，促进铁、钙及其他营养物质的吸收，增强免疫功能，防