摘要：目的：观察金氏痔痛贴（Jin’s Hemorrhoid Patch, JHP）的止血、镇痛作用。方法：采用断尾法测定出血时间，玻片法测定凝血时间；测定大鼠凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）及血小板聚集功能。通过热板法及化学刺激法观察各组小鼠的镇痛作用；采用双抗体夹心法（ELISA法）检测降钙素基因相关肽(Calciton in gene - related peptide, CGRP)水平变化。结果：金氏痔痛贴能明显缩短大鼠的出血时间和凝血时间，且与云南白药相比，差异有显著性意义；金氏痔痛贴能明显缩短大鼠的PT和APTT，并能增强大鼠的血小板聚集功能；该药对热传导及化学刺激引起的拟痛反应有明显的镇痛作用；该药对大鼠血浆CGRP水平有显著升高作用。结果均具有统计学意义（P 2.2金氏痔痛贴对SD大鼠的PT、APTT的影响取清洁级SD大鼠60只，分组及给药方式同2.1。于末次给药后12h，用10％水合氯醛(0.4～0.6mL/100g)腹腔注射麻醉大鼠，打开腹腔，从腹主动脉取血2.7mL，放入加有3.8％枸橼酸钠溶液的试管内（血液与枸橼酸钠的比例为9∶1），混匀后以3000r?min-1离心10min，获得贫血小板（PPP）血浆，然后采用自动凝血分析仪测定PT、APTT。结果见表2。
2.3金氏痔痛贴对SD大鼠的血小板聚集率的影响取清洁级SD大鼠60只，分组、给药方式及采血均同2.2。混匀后以1000r?min-1离心15min，取上层富血小板血浆（PRP）450μL，剩余部分继续以3000r?min-1离心10min，分离贫血小板（PPP）血浆，以贫血小板血浆（PPP）为对照管调零，在富血小板血浆（PRP）中加诱导剂3.33μmol/LADP 40μL，按比浊法于血液凝聚仪测定血小板聚集程度。结果见表3。
2.4对小鼠热板法镇痛的影响[1]因雄性小鼠受热阴囊触及热板，可出现假性结果，所以实验采用雌性小鼠。调节恒温器水温至(55.0±0.5)℃，将500mL烧杯放入其中，使烧杯底部接触水面。每次取昆明种雌性小鼠1只，放入烧杯内。记录自放入烧杯至出现舔后脚所需时间(s)，作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间小于5s或大于30s或跳跃者弃之不用。间隔1h，重复测定其正常痛阈值，取两次正常痛阈平均值，作为该鼠的给药前的基础痛阈值，以平均值不超过30s为合格。将合格小鼠随机分为6组，每组10只，分别为：金氏痔痛贴大(JHPh)、中(JHPm)、小(JHPl)剂量组分别给药（0.9g生药/20g、0.45g生药/20g、0.225g生药/20g）；止痛消炎软膏组：0.45g生药/20g；赋形剂组：0.45g/20g。次日将小鼠背部靠近骶尾部将毛去除干净（面积为1cm2）。将适量受试品或对照品贴于脱毛处，用不致敏胶布固定在小鼠背部，以不影响其舔足为度。分笼饲养，每天换药1次，连续7天。在第7天给药后6h各测定小鼠的痛阈值。小鼠出现舔足反应后，迅速将其取下，以免烫伤。若60s仍无反应，立即取出，其痛阈按60s计算。以小鼠出现舔足反应的时间差(痛阈值 )为观察指标，计算药物镇痛百分率。结果见表4。
2.5对小鼠醋酸扭体法镇痛的影响[1]实验动物、分组、给药同2.4项下。分笼饲养，每天换药1次，连续7天。在第7天给药后6h，揭去受试物，用温水擦拭干净，避免影响其扭体反应。用0.6%的醋酸溶液，按0.1mL/10g的剂量，腹腔注射。以给醋酸后15min内，各受试小鼠出现扭体（腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高）次数为观察指标，计算扭体反应发生次数。结果见表5。
2.6对大鼠血浆CGRP水平测定结果取健康清洁级SD大鼠60只，分组及给药方式同2.1。于末次给药后12h,用10％水合氯醛(0.4～0.6mL/100g)麻醉大鼠，从腹主动脉取血5mL，注入EDTA-2Na(1g/L)和抑肽酶(50mU/L)的试管中，摇匀，4℃，3000r/min离心10min分离出血浆1份，置-70℃低温冰箱保存，待测CGRP值。结果见表6。
2.7统计学处理方法应用SPSS 16.0软件。所有计量数据采用均数±标准差（±s）表示。多组间比较用单因素方差分析。
3结果
3.1对SD大鼠凝血、出血时间的影响金氏痔痛贴大剂量组的凝血时间明显短于中、小剂量组、云南白药组及赋形剂组（P0.05）；金氏痔痛贴大剂量组的出血时间明显短于小剂量组和赋形剂组（P0.05）。见表1。
表1不同剂量金氏痔痛贴及云南白药对
大鼠凝血、出血时间的影响
组别n给药剂量凝血时间(s)出血时间(s)大剂量组100.9g生药/220g45.50±10.08**★★▲▲107.7±23.9**▲中剂量组100.45g生药/220g69.2±10.76**▲147.4±43.02**小剂量组100.225g生药/220g87.8±13.51**236.6±88.66**云南白药106.5cm*2.5cm/220g85.3±11.47**153.1±59.82**赋形剂组100.45g基质/220g122.70±14.46★★▲▲438.6±71.31★★▲▲注：与赋形剂组比较:**P0. 05）。见表2。
表2不同剂量金氏痔痛贴及云南白药
对大鼠PT、APTT的影响
组别n给药剂量PT/sAPTT/s大剂量组100.9g生药/220g 17.19±1.29**★18.68±0.85**★中剂量组100.45g生药/220g15.70±1.40**★17.89±1.34**▲小剂量组100.225g生药/220g17.45±1.67**★21.03±2.35**★云南白药106.5cm *2.5cm /220g 17.32±1.35**20.30±1.68**赋形剂组100.45g基质/220g21.77±2.81▲▲24.55±2.18▲注：与赋形剂组比较: **P0.05; 与小剂量组比较: ▲P0. 05）。见表3。
表3不同剂量金氏痔痛贴及云南白药对
大鼠血小板聚集率的影响
组别n给药剂量ADP(最大聚集率)大剂量组100.9g生药/220g 61.4±12.5*★中剂量组100.45g生药/220g80.8±10.5**★▲小剂量组100.225g生药/220g62.2±11.3*★云南白药106.5cm*2.5cm /220g 78.4±12.5**赋形剂组100.45g基质/220g46.7±10.0注：与赋形剂组比较: *P0.05; 与小剂量组比较:▲P0.05)，提示其提高小鼠热板法痛阈值效果相当；金氏痔痛贴各剂量组镇痛率，与剂量呈线性关系：大剂量优于中、小剂量组；止痛消炎软膏组镇痛率与金氏痔痛贴中剂量组相当。结果见表4。
表4金氏痔痛贴剂对小鼠热板法镇痛的作用
组别n给药剂量用药前 (s)6h后(s)延长率(%)大剂量组100.9g生药/220g 11.34±3.6322.62±7.38**99.47中剂量组100.45g生药/220g11.64±4.2521.40±4.41**83.85小剂量组100.225g生药/220g11.70±3.9320.77±4.10**77.52止痛消炎100.45g生药/220g11.61±4.2921.48±5.65**85.01赋形剂组100.45g基质/220g12.38±4.3112.16±4.54★▲▲注：与赋形剂组比较 : **P 3.5对小鼠醋酸扭体法镇痛的影响金氏痔痛贴各剂量组与赋形剂组比较，能显著降低小鼠扭体发生次数(P0.05)，提示其降低小鼠扭体发生次数效果相当；金氏痔痛贴各剂量组减少扭体发生次数，与剂量呈线性关系：大剂量优于中、小剂量组。结果见表5。
表5金氏痔痛贴剂对小鼠醋酸法镇痛的作用
组别n给药剂量15min内扭体次数大剂量组100.9g生药/220g 7.00±3.89**▲中剂量组100.45g生药/220g14.30±5.10**小剂量组100.225g生药/220g15.70±6.96**止痛消炎100.45g生药/220g12.90±6.49**赋形剂组100.45g基质/220g28.60±7.02★★▲▲注：与赋形剂组比较 : **P0.05)。详见表6。
表6不同剂量金氏痔痛贴及消炎止痛软膏
对大鼠CGRP水平的影响
组别n给药剂量CGRP大剂量组100.9g生药/220g629.21±131.88**▲中剂量组100.45g生药/220g522.74±117.32*小剂量组100.225g生药/220g413.72±124.02止痛消炎100.45g生药/220g427.70±183.69赋形剂组100.45g基质/220g342.50±103.62注：与赋形剂组比较，**P0.05），说明其与云南白药的止血作用相当。该药作用的大鼠PT、APTT与赋形剂组比较均明显缩短，各个剂量组与云南白药作用相当；还能增强由 ADP诱导的血小板聚集功能。以上实验结果共同说明金氏痔痛贴可能作用于毛细血管功能、凝血途径、血小板聚集，从而达到止血的目的。因此可用于治疗痔疮的出血症状。
小鼠热板试验和扭体试验是研究镇痛药物的常用筛选模型，经典可靠，但两者致痛机制不同。热板试验为热刺激致痛，引起的是躯体体表痛。扭体试验是化学刺激剂致痛，引起的是内脏痛[6]。实验表明：金氏痔痛贴各剂量均能延长大鼠对疼痛的反应时间，可以推测金氏痔痛贴的镇痛机制在于对外周及内脏的联合镇痛。CGRP是体内作用最强的舒血管生物活性多肽，具有很强的扩血管作用，可以明显拮抗目前使用的所有收缩剂[7]。目前，关于贴剂与CGRP的相关研究尚未见报道，本实验设想通过测量CGRP的浓度来衡量贴剂作用于大鼠体表能否实现扩张血管的功能，从而减轻疼痛的作用。结果表明：金氏痔痛贴能升高血浆CGRP含量，且升高的程度与药物剂量成正比，并且金氏痔痛贴升高血浆CGRP含量优于止痛消炎软膏。但是此结果与其止血作用的机制有矛盾，因为止血作用不排除通过收缩血管而起的作用。因此，我们猜想也许其止血的主要原理不是通过收缩血管，但是至于两则之间的具体关系还需要进一步的研究。
参考文献
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