【摘要】目的 建立穿心莲注射液中穿心莲内酯的HPLC含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法分析，色谱柱：Agilent TC-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：以甲醇-水（50：50）；检测波长：224nm；流速：1.0mL?min-1。结果 穿心莲内酯在0.02022～0.1011mg?mL-1内呈良好的线性关系，回归方程为y=23822x-15.01，r=0.9999；平均回收率为99.1%（RSD=1.1%）。结论 该方法操作简便，灵敏度高，快速、准确，适用于产品的质量控制。
【关键词】HPLC法 穿心莲注射液 穿心莲内酯 含量
中图分类号：R286 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2011）3-322-02
Determination of Andrographolide in Chuanxinlian Injection by HPLC
XU Yue-xin
(Suqian Institute for Food and Drug Control,Suqian 223800,China)
[Abstract] Objective A HPLC method was developed for Determination of Andrographolide in Chuanxinlian Injection. Methods The Agilent TC-C18 column(4.6mm×150mm,5μm) was used.The moble phase was MeOH-H2O(50:50).The detection wavelength was at 224nm,the flow rate was 1.0mL?min-1. Rusults The determination of paeoniflorin at 0.02022～0.1011mg?mL-1 showed a good linearity. The regression equation was y=23822x-15.01，r=0.9999.The average recovery were 99.1%(RSD=1.1%). Conclusion The method is good in aspect of reproducibility and sensitivity.Soit could be used for quality control.
[Key Words] HPLC；Chuanxinlian Injection；Andrographolide；Content
穿心莲注射液是由穿心莲的乙醇提取物制成的注射液，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，具有清热解毒的功效，主要用于咽喉肿痛，肺热咳嗽，热痢，亦可用于上呼吸道感染，细菌性痢疾等。穿心莲注射液中的主要有效成分穿心莲内酯(andrographolide),是爵床科植物穿心莲And rog raphis paniculata (Burm.f. )Nees的有效成分之一,具有抗菌、消炎、止咳平喘、清热解毒、凉血消肿等作用,广泛用于上呼吸道、消化道的细菌感染所引起的各种疾病[1]。本实验采用HPLC法对穿心莲注射液中有效成分穿心莲内酯的含量进行测定，通过大量实验研究，建立了穿心莲内酯的HPLC分析方法，可以有效的对制剂的质量加以控制，取得了良好的效果。
1 仪器与试药Agilent1100型高效液相色谱仪；岛津AUW120D型电子天平；SK8200LH型超声仪；穿心莲内酯对照品（中检所，批号：110797-200307）；穿心莲注射液为市售。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[2-3]
色谱柱：Agilent TC- C18(4.6×150nm,5μm)；流动相：甲醇-水 (50：50)；流速：1.0mL?min-1；检测波长：224nm；进样量：10μL。
2.2 线性关系
精密称取穿心莲内酯对照品10.11mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，分别精密量取对照品贮备液1，2，3，4，5mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得穿心莲内酯的回归方程为：y=23822x-15.01(n=5)，r=0.9999。结果表明穿心莲内酯在0.02022～0.1011 mg?mL-1线性关系良好。
2.3 空白试验
按处方制备工艺配成不含穿心莲的空白样品，并按样品供试溶液的制备方法制成空白对照液做空白试验，并比较样品、穿心莲内酯对照品、阴性样品的色谱图，结果表明空白样品中其它组分对穿心莲内酯测定无干扰。见图1、2、3。
图1 阴性照品
图2对照品
图3 样品
2.4 稳定性试验
取供试品溶液，在0,3,6,9,12h内重复进样5次，每次10μL，峰面积的RSD为0.6%，结果说明穿心莲内酯在5h内稳定。
2.5 重复性试验
取同一批号样品，按样品含量测定测定项下方法重复测定5份，得穿心莲内酯含量的RSD=0.8%。
2.6 精密度试验
精密吸取线性关系范围项下对照品溶液10μL，重复进样5次，记录对照品峰面积，计算峰面积的RSD=0.7%。
2.7 加样回收试验
精密量取已知含量的供试品2mL六份，分别置10mL量瓶中，各精密加入标准曲线对照品贮备液0.5，0.5，1.5，1.5，2.5，2.5mL，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按样品测定项下的方法进行加样回收试验，计算平均回收率，结果见表2。
表2 回收率测定结果
2.8 样品测定
分别精密量取三个批号的穿心莲注射液各2mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取穿心莲内酯对照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取10μL注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算穿心莲内酯的含量，结果见表3。
表3 样品测定结果
3 讨论
3.1 在穿心莲注射液现行检验标准中，采用比色法来测定穿心莲内酯含量，操作繁琐，且吸光度值不稳定，通过实验证实，吸光度会随着时间推移呈迅速下降趋势，这样必然会造成测定结果不准确。并且比色法专属性不强，容易给一些不法分子提供造假的机会。本文提出的HPLC法可直接测定注射液中穿心莲内酯的含量，方法简便、快速、准确，可作为该制剂的含量控制方法。
3.2 经过更换色谱柱Sunfire C18（4.6mm×250mm，5μm）和Agilent Eclipse XDB C18(4.6×250nm,5μm)试验，结果得到良好的色谱图及重现性，且所得含量一致。
参考文献
[1]江苏新医学院. 中药大辞典:下册[M]. 上海:人民出版社, 1977: 1728 - 1731.
[2]蒋明廉. RP-HPLC法测定穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量[J].广东药学院学报，2008，24（2）：133-134.
[3]黄惠琼, 袁文杰.HPLC法测定妇科千金片中穿心莲内酯的含量[J].中国药事，2004，18（8）：500-501.