【摘要】 目的:探讨D2-40标记阳性淋巴管密度（lymphatic vessel density，LVD）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)组织中的表达以及与临床病理特征的关系。 方法 用SP免疫组化染色法检测46例NSCLC组织标本及10例肺良性病变组织标本中D2-40和E-cadherin的表达，计数D2-40阳性淋巴管密度（LVD）。 结果 D2-40标记阳性LVD主要位于肿瘤边缘区，NSCLC组织中LVD明显高于良性病变组（p ［1］，可用于标记组织中的淋巴管以观察淋巴管形态、分布并进行淋巴管密度（LVD）的计算，其敏感度高、特异性强，为研究NSCLC的淋巴转移提供了更为可靠的手段。E-钙黏蛋白（E-cadherin）是一种钙依赖性跨膜糖蛋白，几乎存在于所有正常的上皮细胞表面，为上皮细胞间黏附的重要分子。E-cadherin的黏附功能在几乎所有的人类上皮性肿瘤，包括乳腺、结肠、前列腺、胃、肝、食道、皮肤、肾和肺癌的发展过程中丢失［2］。本文通过选取46例NSCLC组织和10例正常肺组织进行D2-40和E-cadherin的免疫组织化学的研究，探讨D2-40标记LVD与E-cadherin的表达在NSCLC转移中的关系及其临床意义。?
1． 材料和方法?
1.1材料:(1)实验组 选取2002年1月 ~ 2008年12月我院行肺癌切除手术，经病理证实的46例NSCLC的存档蜡块标本。病人术前均未经化疗及放疗等治疗，其中男28例，女18例，年龄35~78岁，中位年龄59.5岁。依据1981年WHO制定的标准进行肺癌组织学分型，按1997年国际抗癌联盟（UICC）修订的标准进行TNM分期。组织学分型：鳞癌 17例，腺癌20例，腺鳞癌7例，大细胞癌2例；组织学分级：高分化 12 例，中分化 25 例，低分化及未分化9例；其中淋巴结转移阳性35例，阴性11例；TNM分期：I期10例，II期13例，III期23例，各类肺癌均无IV期病例。(2)对照组 选取10例肺良性病变组织作为对照，其中肺大疱5例，肺外伤5例。?
1.2方法:(1)试剂来源 D2-40抗体（1:50抗体编号MAB-0567）、E-cadherin抗体（1:50抗体编号MAB-0247）及SP抗体检测试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。(2)实验方法 标本经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚3μm，脱蜡水化，柠檬酸缓冲液高压修复，SP法免疫组化染色，DAB染色，苏木精对比染色，脱水透明，中性树胶封固。用已知阳性切片作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。?
1.3 结果判定:(1)D2-40标记LVD阳性计数 D2-40阳性：淋巴管内皮细胞的胞浆染成棕黄色，光镜下观察阳性淋巴管呈扩张状或闭塞条索状，管壁为单层扁平上皮，较薄，周围无明显的基底膜及平滑肌细胞，管腔中无红细胞（见图1）。LVD计数采用Weidner等（1992年）报道的方法，先在低倍镜下(×40)分别选取肿瘤边缘和肿瘤中心淋巴管高密度区，然后在高倍镜（×400）下分别计数被染色的淋巴管数目，每个染成棕色的内皮细胞或内皮细胞簇亦视为一个淋巴管，计数3～5个高倍视野下的淋巴管数目，取其平均值作为该例的LVD，单位（个）［3］。(2)E-cadherin的表达 E-cadherin阳性产物分布于细胞膜上 ，为粗细一致的棕黄色颗粒。高倍镜下随机计数5个不同视野，每高倍视野计数100个瘤细胞，以阳性细胞占全部瘤细胞的百分比判断。无着色为（-），阳性细胞≤25%为（+），26%～75%为（++），≥76%为（+++）。将(-)～(+)归为reduced expression，将(++)～(+++)归为normal expression［4］ 。具体见图2、图3。?
1.4 统计学方法:应用SPSS 16.0统计软件。计量资料以（X±S?-）表示，采用单因素方差分析（one way anova）。率的比较采用x?2 检验，D2-40标记阳性LVD数量与E-cadherin异常表达之间的关系用采用x?2 检验。?
2．结果?
2.1 D2-40标记的良恶性肺淋组织巴管的形态特征、LMV分布及意义 D2-40定位于淋巴管内皮细胞胞浆或胞膜，为棕黄色颗粒。光镜下观察D2-40阳性的淋巴管壁为单层扁平上皮，无肌层管，管壁较薄，形态不规则，管腔中无红细胞，呈扩张状或闭塞条索状（见图1）。D2-40阳性的淋巴管多位于瘤周或肿瘤边缘，很少在瘤内。NSCLC组织中D2-40标记阳性的LVD数为21.8±4.1，对照组肺组织中D2-40标记阳性的LVD数为13.8±2.4，两者差异有统计学意义（p ［5］。本研究亦显示D2-40在薄壁淋巴管结构的内皮细胞呈阳性表达，邻近充满红细胞的血管则呈阴性表达。同时在本研究中，D2-40阳性淋巴管多位于瘤周或肿瘤边缘，很少在瘤内。这表明NSCLC瘤内缺少淋巴管生成，可能是由于瘤内淋巴管生成因子的缺乏或淋巴管抑制因子的出现，亦可能是大块肿瘤体产生的静水压可使肿瘤内产生的任何淋巴管被压扁而没有功能所致［6］。NSCLC组织中D2-40显示的LVD平均值高于对照组肺组织，差异有显著性（p ?
Figure3. Pulmonary adenocarcinoma with reduced E-cadherin expression（+）(Immunohistochemical SP ×400)?
Table 1. LVD marked by D2-40 in the patients enrolled in the study and the correlation with expression of E-cadherin ?
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Table 2. The expression of E-cadherin in the patients enrolled in the study and the clinicopathologic characteristics of NSCLC?
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参考文献?
［1］ Kahn H J, Marks A.A new monoclonal antibody, D2-40, for detection of lymphatic invasion in primary tumors ［J］. Lab Invest, 2002, 82 (9) 1225-57.?
［2］ Hirohashi S. Inactivation of the E-cadherin-medaated cell adhesion system in human cancers［J］. AM J Pathol, 1998, 153: 333-9.?
［3］ WEIDNER N. Tumor angiogenesis: review of current applications in tumor prognostication ［J］. Semin Diagn Pathol, 1993, 10(4):302-13.?
［4］ 韩安家，熊敏，李智等。上皮钙依赖粘附素相关分子在乳腺浸润性小叶癌和导管癌中的表达及意义。中华病理学杂志，2001, (30): 27-30.?
［5］ KAHN HJ, BAILEY D, MARKS A. Monoclonal antibody D2-40, a new marker of lymphatic endothelium, reacts with Kaposi"s sarcoma and a subset of anglosarcomas［J］. Mod Pathol, 2002, 15(4): 434-40. ?
［6］ Vleugel MM, Bos R, van der Groep P, et al. Lack of lymphangiogenesis during braest carcinogenesis［J］. J Clin Pathol, 2004, 57(7): 746.