【摘要】目的：制备一种眼用醋酸地塞米松纳米脂质载体温敏型原位凝胶，并对其进行药效学考察。方法：采用薄膜-超声法制备醋酸地塞米松纳米脂质载体，并进一步将其制成眼用温敏凝胶，以辣椒酊制造的家兔眼部炎症模型对其进行药效学评价。结果：醋酸地塞米松纳米脂质载体原位凝胶的抗炎效果与等计量的药物PBS滴眼剂相比具有显著性差异（P >0.05）。结论：醋酸地塞米松纳米脂质载体温敏型原位凝胶比普通的滴眼剂具有更好的药效。
【关键词】醋酸地塞米松；纳米脂质载体；温敏凝胶；药效
The preparation and pharmacodynamic investigation of Dexamethasone Acetate-loaded nanostructured lipid carriers in thermo-sensitive gel
【Abstract】OBJECTIVE To prepare a formulation of dexamethasone acetate-loaded nanostructured lipid carriers in thermo-sensitive gel (DXM-NLC-GEL) and investigate the pharmacodynamic property. METHODS: DXM-loaded lipid nanoparticles were prepared by film-ultrasonic dispersion technique, and then incorporated into thermo-sensitive gel to prepare a kind of multiple drug delivery systems. Pharmacodynamic tests were carried out by an inflammation model creating by chilli tincture on the eyes of rabbits. RESULTS The therapeutic effect of DXM-NLC-GEL was significant difference compared with the same dosage of DXM-PBS eye drops. CONCLUSION therapeutic activity of DXM-NLC-GEL is much better than the conventional dosage form of eye drops.
【Key words】dexamethasone acetate；nanostructured lipid carriers；thermo-sensitive gel pharmacodynamic
醋酸地塞米松（dexamethasone acetate，DXM）是合成糖皮质激素中疗效最强、不良反应最小的药物之一。在药理剂量下可以防止和抑制炎症，是临床上常用的抗炎药物。在眼部炎症的治疗中，由于其较强的脂溶性，常将其制成眼膏或者磷酸盐眼药水。【1】
纳米脂质载体（nanostructured lipid carriers，NLC）是以混合类脂为材料，将物态相异的液态脂质混合到固态脂质中制备而得。它兼具脂质体、微乳以及固体脂质纳米粒【2-5】的优点，具有较好的理化稳定性的同时，还能够调节药物的释放，近年来受到人们的广泛关注。
原位凝胶药物传递系统是随着药用高分子材料学迅猛发展而诞生的新剂型，是指以溶液状态给药后立即发生相转变，形成的非化学交联的半固体制剂。温敏型凝胶是目前研究最为广泛的一种敏感型凝胶。温敏型聚合物溶液在室温或冷藏条件下为自由流动的液体，温度升至体温环境即转变为凝胶。【6】
本文首先将醋酸地塞米松制备成纳米脂质载体后进一步制成温敏型原位凝胶。以辣椒酊制造家兔眼部炎症模型，通过与传统的普通滴眼剂比较，证明醋酸地塞米松纳米脂质载体温敏凝胶具有更好的药效。
1仪器与材料
LC-10AT液相色谱仪（SHIMADZU）；SPD-M10A检测器（SHIMADZU）；紫外灯（北京炳洋科技有限公司）；JY88-山嵛酸甘油酯（Compritol 888 ATO法国佳法赛）；大豆卵磷脂PC90（上海爱康药业，批号0903S01）；醋酸地塞米松（天津天药药业股份有限公司，批号DAC080307）；注射用大豆油（江西金海棠药用油有限公司）；吐温-80（天津远航化学品有限公司）；泊洛沙姆407（P407，F127，BASF）；泊洛沙姆188（P188，F68，BASF）；色谱纯甲醇（浙江禹王）；葡聚糖凝胶G-25（上海君创生物科技有限公司）；重蒸馏水(自制)；荧光素（大连荣宇科技发展有限公司）；5.0%辣椒酊（依据药典自制）；其他试剂均为分析纯。白色家兔，♀、♂兼用，体重2.0-3.0kg（沈阳药科大学动物实验中心提供）。实验前24小时自由进食、饮水，并进行眼部检查，以确保无任何疾病。
2方法
2.1DXM-PBS滴眼剂的制备取5mgDXM用少量PBS缓冲液溶解，倒入100mL容量瓶中，加PBS溶液稀释至刻度即可，所得溶液浓度为0.005%（w/v）。
2.2DXM-NLC的制备采用薄膜-超声法制备DXM纳米脂质载体。精密称取大豆卵磷脂（PC 90）200 mg，山嵛酸甘油酯（ATO）100mg，注射用大豆油100mg及醋酸地塞米松10mg，加入二氯甲烷20mL使其溶解，倒入250mL茄形瓶中，常压下减压旋转蒸发形成含药脂质膜，向其中加入5%的吐温-80水溶液10mL，超声制成初乳，再探头超声（400w，3s on，3s off）5分钟，冰浴冷却，过0.45μm 的微孔滤膜，4℃保存。
2.3 DXM-NLC-GEL的制备将稀释一倍的纳米混悬液（稀释后DXM浓度为0.005%，w/v）置于冰箱中冷藏片刻，于高速磁力搅拌下缓缓加入准确称量的泊洛沙姆，最终配成P407和P188浓度分别是 22%和9.6% w/w的溶液。继续搅拌使分散均匀后，放入4℃冰箱中保存24h以上，直至聚合物完全溶解得到澄明溶液。所得温敏凝胶制剂的胶凝温度为26.4℃，经模拟泪液稀释后的胶凝温度为34.5℃。
2.4药效学考察取健康新西兰家兔24只，雌雄兼用，体重1.8-2.2kg，随机分为4组。各组均作眼结膜炎症模型：固定兔头，拉开下眼睑，每眼滴入5%辣椒酊致炎剂150μL，使其在结膜袋中保持30s后用生理盐水洗去。分别于致炎造模后1h、2.5h、6h、24h、48h按卫生部药政局颁布的“眼刺激反应评分标准【7】”进行评分。每次评分后均给药：1、2组分别给DXM纳米粒凝胶制剂，每眼为100μL，50μL；3组为阳性对照，每次每眼滴入100μL自制的DXM-PBS滴眼液；4组为阴性对照，每次每眼滴入生理盐水（N.S）100μL。以评分值为指标与模型组比较，作组间t检验。
3 结果
3.1药效学考察
表1 各种制剂的药效学结果
Tab.1 Pharmacodynamic results of different formulations caused by chilli tincture
注：*P 0.05
表1表示辣椒酊所致炎症的药效学结果。各给药组致炎后的评分值均小于阴性对照组，有显著性差异（P0.05）。
4 讨论
药效学研究结果显示，在给药剂量相同的条件下，纳米粒凝胶制剂比普通PBS滴眼剂具有更好的疗效。将纳米粒凝胶制剂的给药剂量减少一半，仍可以与PBS滴眼剂达到相同的治疗效果。原因是普通的药物PBS滴眼剂由于流动性较强，在泪液的稀释下很难在眼部滞留，滴入眼部的瞬间即会有大量的药物流失。而纳米粒凝胶制剂，在室温下是自由流动的液体，滴入眼部后在眼睑的剪切作用下形成很薄的液膜，当达到眼表温度34℃后发生相转变形成凝胶状半固体，虽然有泪液稀释，仍在胶凝范围之内，可以很好的粘附在角膜表面，延长了药物与角膜的作用时间，具有更好的药效，是一种非常有潜力的药物剂型。
参考文献
［1］林艳琼. 地塞米松眼用微乳的研究中国药学杂志2006.5p12
［2］E. B. Souto, S. A. Wissing, C. M. Barbosa. Evaluation of the physical stability of SLN and NLC before and after incorporation into hydrogel formulations. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. Volume 58, Issue 1, July 2004, Pages83-90
［3］Wasfy M, Obeidat, Kay Schwabe. Preservation of nanostructured lipid carriers (NLC). European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. Volume 76, Issue 1, September 2010, Pages 56?67
［4］R. H. Müller , M. Radtke, S. A. Wissing. Nanostructured lipid matrices for improved microencapsulation of drugs.International Journal of Pharmaceutics 242(2002) 121-128
［5］Volkhard Jenning, Andreas F. Thünemann, Sven H. Gohla. Characterisation of a novel solid lipid nanoparticles carrier system based on binary mixtures of liquid and solid lipids.International Journal of Pharmaceutics,Volume199,Issue2, 20April 2000,Pages 167-177
［6］Jeong B, Kim SW. Bae YH. Thermosensitive sol-gel reversihie hydrogels [J]. Advanced Drug Delivery Reviews.2002, 54 (1): 37-51.
［7］钮萌萌 环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂眼部给药系统的研究 沈阳药科大学硕士论文2008.5.1 p69