摘要：目的建立以高效液相色谱法测定保健食品中黄芪甲苷含量的方法。方法色谱柱Gemini c。(4.6 mm~250 nm，5 urn)，流动相乙腈一水(32：68)，流速1.0 mL／min，检测波长205 11111，柱温30℃，进样量20结果黄芪甲苷检测浓度的线性范围0.2～8.0g(=0.9999)；平均加样回收率99.35％(RSD=0.79％)。结论本方法简便、准确、重现性好，可用于测定蜂胶黄芪软胶囊中黄芪甲苷的含量。
关键词：蜂胶黄芪软胶囊；高效液相色谱法；黄芪甲苷
中图分类号：S896.6
文献标识码：A
文章编号：1672-979X(2012)03-0120-03
黄芪是多年生草本豆科植物，药理作用广泛。黄芪含有多糖、皂苷、黄酮、氨基酸等多种有效成分，黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一。蜂胶黄芪软胶囊由蜂胶、黄芪、维生素E等组成，具有增强免疫、缓解疲劳，降血糖、预防糖尿病并发症，调节血脂、改善心脑血管等作用。目前，采用高效液相色谱法(HPLC)检测中成药中黄芪甲苷报道较多，我们在此基础上探讨了检测保健食品蜂胶黄芪软胶囊中黄芪甲苷的方法。
1仪器与试药
LC1100液相色谱仪(安捷伦，G21771AA-UV检测器)；KQ3200超声波清洗器(昆山超声)；AY220电子分析天平(日本岛津)；RE-52旋转蒸发器(上海亚荣)；DF2101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义予华)。
蜂胶黄芪软胶囊(辽宁中医药大学，批号：100813，101013，101211)；黄芪甲苷对照品(中国食品药品检定研究院，110781―200613)；乙腈(色谱纯)；其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Gemini cI(250 mm×4.6 mm，5流动相：乙月静水=32：68；流速：1.0 mL／min；检测波长：205nm；柱温：30℃；进样量：20 uL。理论塔板数以黄芪甲苷计不低于4 000。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液取黄芪甲苷对照品10 mg，精密称定，置入100 mL容量瓶，加适量甲醇，振摇使溶解，并定容至刻度，制备成浓度0.10 mg／mL的黄芪甲苷对照品溶液。
2.2.2供试品溶液取供试品内容物适量，按照1：20(重量比)的比例精密加硅藻土适量，混合均匀。精密取混合物适量(约含内容物0.5 g)置入索氏提取器，加甲醇40 mL，冷浸过夜。再加适量甲醇，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩到干。残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 mL，弃氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，柱高12 cm)，以水50 n1L洗脱，弃水液；再用40％乙醇30 mL洗脱，弃洗脱液；继用70％L80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干。残渣加甲醇溶解，置入25 mL量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45um微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3阴性供试品溶液取不含黄芪的空白制剂样品，按“2.2.2”项方法制成阴性供试品溶液。
2.3系统适应性实验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各20 gL注入色谱仪。结果表明，黄芪甲苷峰与其他峰分离完全，阴性供试品溶液在黄芪甲苷出峰位置无干扰。
2.4线性关系考察
精密量取黄芪甲苷对照品溶液适量，用甲醇稀释成浓度分别为0.010，0.049，0.098，0.196，0.392 mg／mL溶液，按“2.1”项色谱条件进样测定。用测得的峰面积与进样量进行回归分析，得回归方程为y=58.68X+53.3(r=0.999 9)。结果表明，黄芪甲苷检测浓度的线性范围为0.207.84。
2.5重现性
取批号101013样品适量，按“2.2.2”项方法制成供试品溶液，平行操作6次，按“2.1”项色谱条件测定。结果表明，本方法重现性良好。
2.6稳定性
取批号101013样品适量，按“2.2.2”项方法制成供试品溶液，分别于0，2，4，8，24，48 h进样分析，记录峰面积。结果表明，供试品溶液48 h内稳定。
2.7精密度
取浓度0.098 mg／mL对照品溶液20连续重复进样5次，记录峰面积，结果表明精密度良好。
2.8加样回收率
按“2.2.2”项方法精密称取混合后样品(批号：101013，含量4，896 3 mg／g)适量，分别精密加入浓度0.12 mg／mL对照品溶液10 mL，按“2.3.2”项方法制成供试品溶液，平行操作6次，按“2.1”项色谱条件进样测定，计算平均回收率。
2.9样品含量测定
精密称取3批蜂胶黄芪软胶囊内容物适量，按“2.2.2”项方法制成供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进样测定。 3讨论
本实验供试品溶液的制备参考中国药典2010年版一部和有关文献的相关内容，确定以正丁醇提取。氨试液洗涤正丁醇提取液，然后经D10I型大孔吸附树脂柱，用70％乙醇洗脱，蒸干洗脱液，再用甲醇溶解。
目前，黄芪甲苷的含量测定通常采用紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法和荧光法等。其中高效液相色谱法可以采用HPLC-UV法、HPLC一示差折光检测器法等。保健食品蜂胶黄芪软胶囊中黄芪甲苷的含量较高，可采用HPLC-UV法测定。在上述实验条件下，仪器精密度、指标成分稳定性、方法重复性和加样回收率等均较好，符合定量要求，可用于测定蜂胶黄芪软胶囊中黄芪甲苷的含量。
参考文献
[1]王景，HPLc测定归脾丸(浓缩丸)中黄芪甲苷的含量[J].中国当代医药，2010，17(26)：4647.
[2]林绪芳，刘健，邓小辉，高效液相色谱法测定全营养混合液中黄芪甲苷的含量[J].实用lNNNN.N，2010，14(19)：74.75.