摘要：目的：观察胃乐煎对HP感染模型大鼠胃病理组织的影响。方法：大鼠在去氧胆酸钠法造模基础上，灌胃丽珠维三联，清除大鼠胃?杂菌，再经口灌幽门螺杆菌（HP）复制HP感染模型，模型大鼠随机分组，观察胃乐煎对HP模型大鼠胃组织黏膜炎症指标、胃腺体厚度、腺体数量、壁细胞及主细胞的情况。结果：胃乐煎对HP模型大鼠体重有明显增加（P＜0.05～0.01）；对HP模型大鼠胃腺体数目、腺体厚度、主细胞数目均有明显增加（P＜0.05～0.001）；对HP模型大鼠胃组织炎症指标有显著降低作用（P＜0.001）。结论：胃乐煎对HP模型大鼠胃组织有明显的改善作用。
关键词：Wistar大鼠； HP感染模型； 胃乐煎； 胃病理组织
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2012)03-0551-03
Effect of Weilejian on Pathology in Gastric of Rats with Helicobacter Pylori
Associated Chronic Atrophic Gastritis
DAI Guan?hai，TONG Ye?ling，ZHANG Chun?li，YANG Min，LU Zheng, YANG Feng
(Institute of Basic Medicine, Zhejiang Academy of TCM, Hangzhou 310007, Zhejiang,China)
Abstract:Objective: To observe the effect of Weilejian on pathology in gastric of rats with Helicobacter pylori(Sydney Strain 1,ss1) associated chronic atrophic gastritis(CAG). Methods: HP associated chronic atrophic gastritis models were induced (Rats were treated with sodium deoxycholate ,then fed-J yuansuan Bijia Pian for clear rat stomach bacteria, And cultured HP(ss1) were orally administered). HP associated CAG rats were randomly divided into the groups treated with Weilejian with different doses. Inflammatory reaction, the thickness and the number of gastric glands, the number of parietal cells and chief cells in rat gastric mucosa were observed. Results: Weilejian can significantly increase body weight（P＜0.05～0.01）, can significantly increase the number of gastric glands, the glands thickness, the number of primary cells（P＜0.05～0.001） and significantly reduce the indicators of gastric inflammation（P＜0.001） for HP associated CAG. Conclusion: Weilejian can significantly improve the rat gastric tissue for HP associated CAG.
Key words:wistar rats；HP associated CAG；weilejian；pathology in gastric
胃乐煎是国家级名老中医陆拯主任中医师多年从事脾胃病的经验方基础上增加蜂胶研制成，对胃脘痛、胃痞等具有显著疗效。现代药理学研究证明，蜂胶具有免疫增强作用、抗氧化作用、抗溃疡作用和抗菌消炎作用[1]。因此我们用该方对HP感染模型大鼠进行实验观察，为临床上胃乐煎治疗HP感染提供实验依据。
1实验材料
1.1实验药物胃乐煎片：棕色颗粒，主要由蜂胶、鸡矢藤、吴茱萸、炒白术、黄连、枳壳等组成，每片重量0.47g，含2.107g生药，临床用量为每人12片／日，60片/瓶，批号：100401，每片含黄连（以盐酸小檗碱C20H17NO4?HCl计)为3.86mg，含枳壳（以柚皮苷C27H32O14）为9.02mg，由上海交大穗轮药业有限公司提供（我院委托加工），使用时用蒸馏水配成所需浓度；养胃舒冲剂：为棕黄色至棕色的颗粒，味酸、甜，由党参、白术、黄精等组成，10g×6袋，批号：0902206，合肥神鹿双鹤药业有限公司生产；丽珠维三联：由枸橼酸铋钾片、替硝唑片、克拉霉素片组成，批号090502，由丽珠集团丽珠制药厂生产。
1.2实验试剂哥伦比亚血琼脂基础：Oxoid公司产，批号 CM0331，规格：500g/瓶，购买于北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司。无菌脱纤维羊血：购买于北京兰伯瑞生物技术有限责任公司生产，批号 091130，规格：100mL/瓶；去氧胆酸钠（Deoxycholicacid Sodiusalt）：500g/瓶，上海蓝季生物公司购买。
1.3实验仪器HR40-IIA2生物安全柜、XQ-280SD高压灭菌器、TGL-168离心机、YQX-II型厌氧培养箱、CM1850 LEICA病理切片机、BM-VI生物组织冷冻包埋机、T S-12F生物组织自动脱水机、2.0 M PLXEL病理图像分析系统。
1.4实验动物幼龄Wistar大鼠，雌雄兼备，体重80～100g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，许可证号码：SCXK（沪）2007-0005，动物合格证号：2007000505169，饲养于浙江省中医药研究院动物中心，许可证号：SYXK(浙2009-0122)。
1.5HP菌SS1株( Sydney Strain 1)中国疾病预防控制中心赠送，接种在含10%羊血及幽门螺杆菌选择性添加剂（含万古霉素10μg/mL、头孢磺啶5μg/mL、甲氧苄啶5μg/mL、两性霉素B 5μg/mL）的哥伦比亚血琼脂培养基上，37℃、微需氧条件下( 5% O2、10% CO2、85% N2) 培养。
1.6统计学处理数据均以±s表示，经单因素方差分析后采用ANOVA t检验进行统计分析。
2实验方法
2.1大鼠经口幽门螺杆菌（HP）感染模型取80～100g的幼龄Wistar大鼠，雌雄各半，按去氧胆酸钠法造模慢性胃炎法[2]，用20mmol/L去氧胆酸钠和60%乙醇联合刺激，连续3周，再灌胃丽珠维三联（0.20g/kg）1周，清除大鼠胃?杂菌，禁食12～14h，灌胃5％NaHCO32mL，5min后灌胃从培养基上冲洗下的HP菌液1.5mL（108～1010cfu），30min后给食，每周感染2次，共8次。
2.2实验方案取84只上述方法造模后大鼠，随机分为6组，每组14只，雌雄各半，分别为胃乐煎高剂量组（10.60g生药/kg）、中剂量组（5.30g生药/kg）、低剂量组（2.65g生药/kg）、养胃舒对照组（4.0g/kg）、丽珠维三联对照组（0.20g/kg）及模型对照组（生理盐水10mL/kg），另取14只正常大鼠作为正常空白对照组（未造模）。丽珠维三联阳性组给药1周，其它各组分别给相应药物6周，并停药4周。实验结束时，7组大鼠均禁食12h，脱颈椎处死大鼠，取胃用无菌生理盐水洗去胃内容物，用福尔马林固定，常规制作病理切片，观察胃黏膜炎症情况、胃黏膜腺体厚度、胃腺体数目、壁细胞、主细胞数目等指标。炎症情况按炎症细胞浸润的程度分为0～3七个级别，0级：无炎症；0.5级：镜下观察炎症介于0与1之间；1级：在胃小凹区或固有腺底部可见多个慢性炎细胞浸润；1.5级：镜下观察炎症介于1与2之间；2级：在胃黏膜小凹至黏膜肌层均有较多炎细胞浸润；2.5级：镜下观察炎症介于2与3之间；3级：胃黏膜内可见成堆炎细胞聚集灶。
3实验结果
3.1胃乐煎对HP模型大鼠体重的影响结果见表1～2、插页Ⅳ图1。由表1～2及插页Ⅳ图1可见，HP模型大鼠的体重较正常组有明显下降（P＜0.05～0.001），给胃乐煎后大鼠体重较模型大鼠有明显增高，给药6周后尤其明显（P＜0.05～0.01）。
3.2胃乐煎对HP模型大鼠胃黏膜病理组织的影响结果见表3～4，插页Ⅳ图2～6。由表3～4可见，HP模型大鼠的腺体厚度、腺体数目、主细胞较正常组有明显下降（P＜0.001），而炎症指数较正常组有明显升高（P＜0.001）；给药胃乐煎后大鼠腺体厚度、腺体数目、主细胞有明显增加，炎症指数有明显下降，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05～0.001）；胃乐煎对大鼠壁细胞数量的影响不明显。上述指标显示，胃乐煎对HP模型大鼠的胃组织有明显的康复作用。
由插页Ⅳ图2～6可见，正常组大鼠胃黏膜上皮细胞排列整齐，无缺损或脱落，腺体形态规则，大小形态基本一致，上皮细胞多呈单层排列，细胞质透明或呈小空泡状，腺上皮与腺管间分界较清楚；固有层偶见少许急、慢性炎细胞浸润，其间毛细血管无扩张充血现象，黏膜肌层平滑肌呈环状排列较薄，未见增生及向黏膜层深入的现象。模型组大鼠胃黏膜萎缩变薄，腺体数量略有减少，间质内有多量急、慢性炎细胞浸润，有些炎细胞成团聚集，毛细血管扩张充血，黏膜肌层增厚，结缔组织及平滑肌组织增生并向黏膜层腺体间伸延。主细胞、壁细胞均不同程度略有减少，未出现明显肠化现象。胃乐煎治疗后炎症细胞浸润状况有减少，黏膜层仍有多量急、慢性炎细胞浸润，黏膜排列规整，腺体、细胞大小、形态一致，无明显变性坏死，平滑肌增生不明显，壁细胞与模型组比较无明显差异，无不典型增生及肠化现象。
4讨论
胃乐煎是国家级名老中医陆拯主任中医师多年从事脾胃病的经验方基础上增加蜂胶研制成，在临床观察中该经验方对胃脘痛、胃痞等具有显著疗效[3]。本方由蜂胶、鸡矢藤、吴茱萸、炒白术、黄连及枳壳组成。方中蜂胶为君药，性苦寒，具有抗菌消炎、调节免疫、抗氧化的作用[4]，臣以鸡矢藤，具有解毒消肿，活血止痛作用[5]；白术苦甘性温，“扶植脾胃，消食除痞”，具有调节胃肠道蠕动，保护胃黏膜的作用[6]；吴茱萸归肝、脾、胃、肾经，味辛苦而性热，既能温胃暖肝以祛寒，又善和胃降逆以止呕，兼有行气止痛[7]；佐以黄连清热解毒，祛湿调中，且能监制湿燥之性，不致伤阴，研究表明清热药能增强微循环，有利于改善胃黏膜的血液供应和营养，降低血管的通透性，减少炎症渗出，有利于局部炎症的消散和吸收[8]；使以枳壳行气散结，宽中消胀，理气不伤阴，又能引诸药以入脾胃[9]。全方辛开苦降、寒温并用，补泻兼施，共奏健脾益气，止痛消痞，活血化瘀功效，使肝气疏泄，脾胃气机调畅，则诸症可愈。
实验表明，胃乐煎对HP模型大鼠体重有明显增加作用，对胃腺体数目、腺体厚度、主细胞数目均有明显增加，对胃组织炎症指数有显著降低作用，上述指标显示，胃乐煎对HP模型大鼠的胃组织有明显的康复作用，这为胃乐煎开发为中药新药提供实验依据。
参考文献
［1］钟立人，韩文辉，陈荷凤．蜂胶对幽门螺杆菌的抑制作用[J]．天然产物研究与开发，2002，14(6)：38-41.
[2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].3版.北京：上海科学技术出版社，2006：503-504.
[3]CHEN Ming-xian.Experience of Professor Lu Zheng in treating atrophic gastritis[J].Journal of T radit ional Ch ineseM edicine, 2008, 50(1): 13-14.
[4]于峰，任强.复方蜂胶口服液抗胃溃疡作用的药效学研究[J].中南药学,2008,6(5):539-541.
[5]王振富.鸡矢藤抗炎镇痛作用的实验研究[J].中国民族民间医药,2009, 24: 30-31.
[6]贺晓芳，贾波，祝捷，等.白术茯苓汤及提取组分对脾气虚大鼠肠道局部免疫功能的影响[J].辽宁中医杂志,2010, 37(1): 165-166.
[7]于肖，吴大正. 黄连吴茱萸药对水提物对乙醇致大鼠胃损伤的保护作用[J].中国实验方剂学杂志, 2010,16(2):60-64.
[8]李冀，谢田，柴剑波，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对幽门结扎型、醋酸涂抹型胃溃疡寒热证模型大鼠血清NT含量的影响[J].中医药学报,2011, 39(1): 38-41.
[9]蒋以号，王晶，曹??，等.中药枳壳的研究概况[J].中国医药导刊,2008, 10(8):1238-1240.