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[玉竹对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用]3%过氧化氢可以诱导细胞损伤

时间:2019-01-23 来源:东星资源网 本文已影响 手机版

  [摘要]目的:探讨玉竹水提液对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:用64mJ?cm-2的UVB照射人皮肤角质形成细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度玉竹提取物处理光老化细胞,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌量。结果:UVB照射角质形成细胞后,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高,TNF-α、IL-6分泌量增加(P   2.2 HaCaT的培养:HaCaT细胞在含有10%胎牛血清的MEM培养基,37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养。取对数生长期的细胞以0.25%胰酶和0.02%EDTA消化,调整其密度为5×105个?ml-1,定量接种于12孔板。
  2.3 细胞光老化模型的建立:参照文献[4-5]的方法,将处于对数生长期的细胞接种于12孔板,待细胞单层贴壁后,弃培养液,每孔加入1ml PBS,使用64mJ?cm-2的UVB照射,空白组用铝箔盖住。
  2.4 实验分组:预实验时设置50μg?ml-1、100μg?ml-1、150μg?ml-1、200μg?ml-1、250μg?ml-1、300μg?ml-1 6个剂量组做玉竹对正常HaCaT细胞的毒性作用实验,发现250μg?ml-1、300μg?ml-1对HaCaT细胞有明显毒性作用,因此正式实验确定的玉竹最高剂量组为200μg?ml-1。
   将处于对数生长期的细胞接种于12孔板,随机分为空白组、模型组、玉竹水提液低(50μg?ml-1)、中(100μg?ml-1)、高(200μg?ml-1)剂量组。接种24h后各组弃培养液,每孔加入1ml PBS,除空白对照组外,按照2.3的方式造模。照射后弃去PBS,加入含药的MEM培养基继续培养。以上各组细胞每组设6个复孔。
  2.5 检测细胞中SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量:给药24h后收集各组细胞,用冷PBS清洗2次,超声破碎细胞,严格按照试剂盒说明书操作,检测SOD活性,GSH-Px活性和MDA含量。
  2.6 ELISA方法检测细胞上清液中TNF-α、IL-6:给药24h后收集各组细胞的上清液,按照ELISA试剂盒操作说明书检测肿瘤坏死因子TNF-α和白介素IL-6的分泌量。
  2.7 统计学方法:用SPSS13.0软件对结果进行统计分析,多样本间的方差分析采用LSD法,以P

标签:玉竹 诱导 损伤 细胞