(1.青海省藏医药研究院药物研究所，青海西宁810007；2.青海大地药业有限公司青海西宁810003)摘要：目的建立测定牧马豆药材不同部位金雀花碱的RP-HPLC的方法。方法以Alent Cls色谱柱(250 mmX4.6 mm，5 gm)为分析柱，乙腈-0.02％醋酸铵，三乙胺(15：85：0，02)为流动相，检测波长230 nm，柱N40℃。结果进样量在0.35～1.75范围，金雀花碱峰面积与浓度呈良好线性关系(r=0.9999)，回收率98.2％(=6)。结论此法简便、快速、准确，可用于测定该药材中金雀花碱的含量。
关键词：牧马豆；金雀花碱；HPLC
中图分类号：11282.71
文献标识码：B
文章编号：1672-979X(2012)03-0123-03
牧马豆是双子叶植物豆科披针叶黄华Thermopsislanceolata R.Br.的全草。具有祛痰，止咳，治痰喘等功效。全草含生物碱0.5％～3％，主要有金雀花碱、黄华碱等，叶含少量黄酮类化合物，种子含生物碱达5％，主要成分为金雀花碱。近期研究表明，此类生物碱还具有抗心率失常、抗微生物感染、抗溃疡、升高白细胞等药理作用，特别有较强的抗癌活性。因此，控制牧马豆中金雀花碱的含量很有意义。我们经过多次试验，测定了牧马豆不同部位的金雀花碱含量，结果表明此法简便、快速、准确，可靠、重复性好，可用于牧马豆药材的质量控制，为进一步开发利用牧马豆药材提供了参考依据。
1仪器与试药
LC-20AT液相色谱仪(日本岛津)；LC-solution工作站。
金雀花碱(上海融禾，批号：090221，纯度98％)；重蒸水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。
牧马豆药材采自青海贵德、互助、西宁等地，经本所余满堂研究员鉴定为豆科植物披针叶黄华Thermopsis lanceolata R.Br.的全草；分别取不同产地的牧马豆全草若干，晾干，分离根、茎、种子，分别粉碎过40目筛，备用。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Agilent c1 8色谱柱(5 gm，250ram4.6 mm)；流动相：乙腈0.02％醋酸铵一三乙胺(15：85：0.02)；检测波长为230 sin；柱温40℃。结果表明，金雀花碱与样品中其它组分可基线分离，按金雀花碱峰计算，理论板数约为4000。
2.2对照品溶液制备
取金雀花碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含金雀花碱0.3 mg溶液，即得。
2.3供试品溶液制备
取本品约0.5 g，精密称定，置入锥形瓶，精密加甲醇25 mL，称定重量，置80℃水浴回流提取1 h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10 mL，挥干甲醇，残渣用稀盐酸8 mL溶解，酸液移置入分液漏斗，用三氯甲烷洗涤3次(10 mL／次)，弃去三氯甲烷液，酸液再用氢氧化钠溶液调pH至9~11，用三氯甲烷提取3次(8 mL／次)。收集三氯甲烷液，挥干溶剂，残渣精密加甲醇5 mL，再经0.45m微孔滤膜过滤，取滤液即得。
2.4线性关系考察
精密吸取2.2项对照品溶液5 mL，置入10 mL量瓶，摇匀，制成含金雀花碱对照品0,175 mg／mL的溶液。精密吸取2，4，6，8，10 mL对照品溶液，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标(y)，进样量为横坐标，绘制曲线，即得。金雀花碱在0.35～1.75kg范围内呈良好的线性关系，回归方程为y=489 533X+823 682，r=0.999 9。
2.5精密度
精密吸取金雀花碱对照品溶液10 mL，重复进样5次，测得金雀花碱峰面积RSD为1.2％，表明仪器进样精密度良好。
2.6稳定性
精密吸取样品溶液10 mL，分别于2，6，8，10，12 h进样测定金雀花碱含量，RSD为1.4％，即样品溶液在12 h内稳定。
2.7重现性
取同一样品6份，按含量测定项下色谱条件测定，RSD为1.5％，表明此方法重现性良好。
2.8回收率
精密称取6份已知含量的牧马豆(种子)样品0.25 g，分成3组，每组分别加入金雀花碱对照品溶液5，10，15 mL，低温挥干溶剂，按样品制备方法和测试条件测定，计算得金雀花碱平均回收率98.2％，RSD为0.987 5％。
2.9测定不同产地牧马豆中金雀花碱的含量
3讨论
3.1从三地牧马豆不同部位的含量测定结果可见，三地牧马豆均含有金雀花碱成分，而且以种子含量最高，根次之，茎最低。青海互助与西宁两地牧马豆各部位含量相近，可能与两地气候相似有关。
3.2测定金雀花碱含量过程中分别用甲醇、乙腈、乙醇等溶剂初始提取，结果以甲醇提取效果较好，提取效率较高。分离过程中比较过不同比例的乙腈一水；甲醇一水一三乙胺；甲醇，醋酸铵；乙腈一0.01醋酸铵，三-乙胺等多种溶剂系统作为流动相，结果以乙腈0.01醋酸铵。三乙胺(15：85：0.02)作为流动相，色谱峰型好，保留时间适宜，分离效果较好。
参考文献
[1]甘肃省卫生厅甘肃中草药手册[M].兰州：甘肃人民出版社，1974：275-276.
[2]王宝琴，中成药质量标准及标准物质研究[M]北京：中国医药科技出版社，1992.