摘要：目的：探讨蔡氏内异方对子宫内膜异位症血清及腹腔液中细胞因子IL-2，TNF-α的影响作用。进一步阐明蔡氏内异方的作用机理 方法：采用ＳＤ大鼠自体移植建立ＥＭ模型，采用ELISA法检测血清及腹腔液中IL-2，TNF-α的含量。结果：TNF-α在模型组大鼠腹腔液及血清中都明显高于正常组，中药干预组TNF则明显低于模型组。IL-2水平在模型组大鼠血清中低于正常组，而腹腔液中IL-2则明显高于正常组，中药干预组血清中IL-2水平升高，腹腔液中水平下降。结论：血清及腹腔液中细胞因子IL-2，TNF-α水平的不同改变与子宫内膜异位症的发病有关，内异方通过调整IL-2，TNF-α的水平，改善全身和局部免疫水平，协调免疫平衡而达到治疗效果。
关键词：子宫内膜异位症；内异方；白细胞介素-2；肿瘤坏死因子
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2012)03-0537-03
Effects of Neiyifang on IL-2 And TNF-α in Serum And
Peritoneal Fluid of EM"s Model Rats
FU Jin?rong1，ZHENG Jin1，WANG Fang2，XU Hua?yun2，TIAN Li?xia1
(1.Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200032,China;
2.Longhua Clinical Medical Institute Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200032,China)
Abstract:Objective: To investigate the effects of Neiyifang on expressions of IL-2 and TNF-αin Ems"serum and peritoneal fluid. To clarify the mechanism.Methods: The model of Ems in SD rats was duplicated by autologous transplantation，the contents of IL-2 and TNF-α in serum and peritoneal fluid were detected by ELISA. Results: The level of TNF-α in serum and peritoneal fluid in the model group was clearly higher than the normal group, in the TCM group was clearly lower than the model group, the level of TNF was clearly lower than that in the model group. The level of IL-2 in serum was lower than that in the nomal group,while in peritoneal fluid was clearly higher than that in the model group and the TCM group . The content of IL-2 increased in serum while decreased in peritoneal fluid.Conclusion: The different changes of IL-2 and TNF-α in serum and peritoneal fluid were related to the occur of Ems,Neiyifang treating Ems is related to adjusting the levels of IL-2 and TNF-α ,improving the whole body"s and local immunity function and coordinating the balance of immunity.
Key words:endometriosis; Neiyifang; interleukin-2; tumor necrosis factor
收稿日期：2011-10-08
基金项目：上海市科委专项基金资助项目[09dz（9）6800]
作者简介：付金荣（1967-），女，江西九江人，主任医师，硕士研究生导师，博士，研究方向：中医药防治子宫内膜异位症的临床及实验研究。子宫内膜异位症(简称内异症,endometriosis,EM)患者80 %有痛经,50 %合并不孕,给育龄妇女健康和生活质量带来巨大的影响〔1〕。近年来的研究表明，内异症患者腹腔液中巨噬细胞数量增多，活性增强，这些巨噬细胞通过释放多种活性物质如细胞因子IL-2、TNF-α、TGF-β、IL-6等，干扰了生殖过程中的某些环节，引起不孕。
导师蔡小荪教授采用活血化瘀散结法治疗?异症取得满意疗效。临床不仅能改善?异症疼痛症状，且能明显提高受孕率。蔡氏内异方（茯苓、桂枝、皂角刺、石见穿、水蛭等）具有活血化瘀、软坚散结的作用，其初步作用机理能调整内分泌，降低前列腺素水平。本研究通过观察内异方对子宫内膜异位症模型大鼠腹腔液及血清IL-2、TNF-α的影响。进一步探讨该方的作用机理。
1材料与方法
1.1实验动物清洁级雌性SD大鼠50只，体重（200±20）g，由上海中医药大学实验动物中心提供。（合格证号：SCXK（沪）2007-0005）
1.2主要药品、试剂“内异方”水煎剂（组成药物：云茯苓、桂枝、皂角刺、石见穿、莪术、水蛭等），购自上海中医药大学附属龙华医院，由上海中医药大学实验动物中心煎制，孕三烯酮片（北京紫竹药业有限公司生产，批号：53030402），2.5mg/粒，酶联免疫试剂盒，由钰森生物科技有限公司提供。
1.3模型制备参照Masahiro（Am J obstetGynecol 1990，160:1679-1684）方法行大鼠自身种植内膜，造模成功评判标准是：成功异位内膜有积液形成突起，并测量成活内膜长、宽、高，计算其体积，凡积液高度>1.5mm均筛选出作为成功模型，并选出一只送病检。然后随机分组，而正常组按上述方法行二次开腹，切除左侧子宫一段，但不行种植。所有动物喂养3周,每日行阴道涂片，显微镜下观察，选择无情期处死动物,取材。
1.4分组给药将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组，每组12只，正常组12只，正常组及模型组均灌胃2mL生理盐水，中药组给予内异方，按25.2g?kg-1?d-1将中药煎液加热浓缩成2mL，使2mL药量效价相当于成人一天的用药量，每日灌胃2mL。西药对照组：采用孕三烯酮，按2.5mg?kg-1?d-1计算，按1∶10的比例溶解成混悬液每日灌胃2mL。
1.5检测指标给药3周结束后，将大鼠麻醉后开腹，腹主动脉取血4～5mL，离心后提取上清液放入-20℃保存待检。吸管吸取腹腔液2mL与血清同条件保存。采用酶联免疫法测定IL-2、TNF-α蛋白浓度。药盒由钰森生物科技有限公司提供。按药盒说明书操作。
1.6统计学方法采用SPSS 18.0统计软件处理，计数资料用±s表示，采用单因素的方差分析。
2结果
2.1模型大鼠血清IL-2、TNF-α的水平变化结果显示，与正常组相比，模型组的IL-2水平降低,差异有统计学意义，使用中药干预后，IL-2水平升高，与模型组相比，差异有统计学意义（P