【摘要】目的：探讨松龄血脉康胶囊对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响及对组织中eNOS和ET在mRNA水平的调控。方法：SHR大鼠24只，平衡血压2周后随机分为3组（空白组、中药组、西药组），每组8只。中药组以松龄血脉康胶囊20mg/（kg?d）灌服；西药组以雷米普利1mg/（kg?d）灌服，空白组给予同体积的生理盐水，连续4周。采用尾动脉无创测压法检测血压，一周一次。用药四周后，腹主动脉取血处死，冰上取肝脏，荧光实时定量PCR技术检测肝脏eNOS和ET mRNA的表达水平。结果：松龄血脉康胶囊给药4周后，可有效抑制血压上升，调控血压使血压有逐渐下降的趋势；显著上调组织中eNOS mRNA的表达，下调组织中ET mRNA的表达。结论：松龄血脉康胶囊能调控组织中eNOS和ET在mRNA水平的表达，参与对血压的调节。
【关键词】松龄血脉康；eNOS；ET
血管内皮功能在心血管系统中起着重要的作用，内皮来源的血管活性物质参与了血压的调节，其中一氧化氮（NO）和内皮素（ET）是两种最具代表性的物质。NO是体内最主要的舒血管物质，主要受内皮一氧化氮合酶(eNOS)的调控。ET具有强烈收缩血管作用。松龄血脉康胶囊是目前用于高血压治疗确有疗效且毒副反应小的中成药。已有研究表明[1]，松龄血脉康能降低血浆中NO和ET含量。但是，松龄血脉康对组织中eNOS和ET在mRNA水平的调控尚未确定。本文研究了松龄血脉康对自发性高血压大鼠(SHR)组织中eNOS与ET mRNA表达的影响。
1 材料
1.1 实验动物：10周龄雄性SHR大鼠，体重(250±20)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司（许可证号：SCXK（京）2007-0001），饲养于室内通风橱内，恒温（22±2）℃，自然昼夜，自由取食及饮水。
1.2 药品和试剂：松龄血脉康胶囊，批号：100513，成都康弘制药有限公司生产；雷米普利(Ramipril，瑞泰)片剂，批号：c0001，赛诺菲安万特制药有限公司生产；实时定量PCR 试剂均购自天津市灏洋生物制品科技有限公司，引物由上海生物工程有限公司合成。
1.3主要仪器：无创鼠尾压测量仪(BP98AWU，日本软隆)；DY89-1实时定量PCR仪-Linegene 9620 (BIOER)；PCR仪-杭州博日科技有限公司TC-96/g/h(b)。
2方法
2.1分组：SHR大鼠24只，平衡血压2周后随机分为3组（空白组、中药组、西药组），每组8只。各鼠每日相同时间灌胃给药1次，其中中药组以松龄血脉康胶囊20mg/（kg?d）灌服；西药组以雷米普利1mg/（kg?d）灌服，空白组给予同体积的生理盐水，连续4周。
2.2检测指标
2.2.1血压测定：采用尾动脉无创测压法。在干燥、通风、安静的环境中将大鼠置于37℃恒温袋内预热10min，使大鼠尾动脉充分扩张，将传感器套在鼠尾根部，待大鼠短暂躁动停止后，连续测定3次取平均值作为血压。
2.2.2肝脏eNOS、ET mRNA表达量测定。大鼠腹主动脉取血后，取肝脏使用Trizol试剂提取总mRNA，引物序列见表1。
取总RNA1μg，按照说明书进行逆转录合成cDNA。荧光定量PCR反应条件为：95℃，15min；95℃，20sec；57℃，20sec；40个循环，反应体系为20μL。选取15～25个扩增循环数(cycle threshold，Ct)的荧光信号，计算三个平行复孔的扩增效率，计算ΔCt(=Ct目的基因－Ct内参基因)和ΔΔCt(=(Ct实验组目的基因－Ct实验组内参基因)－(Ct对照组目的基因－Ct对照组内参基因))，并计算实验组目的基因与对照组目的基因的差异表达量2－ΔΔCt(=实验组目的基因/对照组目的基因)。
2.3统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，各组间比较采用方差分析进行统计处理。显著性差异水平定为0.05。
3 结果
3.1松龄血脉康对血压的影响空白、中药、西药三组基础血压无差别；用药两周时，中药组和空白组比较血压开始有差异（P 本研究发现，经过松龄血脉康治疗后，SHR组织中ET mRNA的表达降低，提示松龄血脉康可通过降低组织中缩血管物质水平而降低血压。另一方面，eNOS可以促进体内NO的合成，进而舒张血管，降低血压。本研究同时还发现，SHR经过松龄血脉康治疗后，组织中eNOS mRNA表达量明显上调，提示松龄血脉康可通过提高组织中eNOS mRNA的表达水平，达到降压目的。本课题已经发现松龄血脉康能有效降低血浆AngⅡ含量，由此还可以间接抑制ET的转录和ET-1的缩血管效应。
参考文献
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项目名称：天津市自然科学基金“中药干预肝阳上亢型高血压不同模型物质基础变化的机理”
课题号：09JCZDJC20600
通讯作者：赵英强，主任医师，教授