摘要：目的建立银黄注射液生物活性测定法的质量标准。方法用内毒素造成家兔发热模型，观察银黄注射液的解热作用，以采用生物活性测定法评价药品质量。结果静脉注射细菌内毒素可引起家兔稳定的发热，银黄注射液对细菌内毒素所致家兔体温升高有明显抑制作用。结论可以采用药物对细菌内毒素所致家兔发热模型的影响评价银黄注射液的生物活性。
关键词：银黄注射液；解热；药效学；生物检定
中图分类号：R282.71
文献标识码：B
文章编号：1672-979X(2012)03-0125-03
生物活性测定法是以药物的生物效应为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计控制药物有效性的一种方法。其测定方法包括生物效价测定法和生物活性限值测定法。
中药材来源广泛多变，中药制剂制各工艺复杂，而且往往有多种活性成分和多种药理作用，仅控制少数成分不能完全控制中药制剂的质量和临床疗效。如，绿原酸和异绿原酸被认为是金银花的主要抗菌成分，但另有报道，金银花经加热炮制后绿原酸含量有所下降，但抑制痢疾杆菌、变形杆菌的作用却有所加强，表明绿原酸并非金银花的唯一抑菌成分。金银花抗菌作用的有效成分和作用机制有待进一步研究。采用化学分析法测定绿原酸含量不一定是控制金银花及其制剂质量和有效性的可靠手段。
为使中药的质量标准能更好地保证每批药品的临床使用安全有效，有必要在现有测定指标成分含量的基础上增加生物活性测定，以综合评价其质量的可靠性和可控性。
我们采用细菌内毒素所致家兔发热模型研究了银黄注射液的解热作用，以期通过测定解热作用活性测定评价药品质量。
1材料
1.1动物
家兔，新西兰品系，体重1.7～3.0kg，雌雄不限，山东鲁抗医药质检中心实验动物室提供，许可证号：SCXK(鲁)20080002。
1.2药品与试剂
银黄注射液(规格2 mL，批号070601、070602、070603，四川三精升和)；细菌内毒素国家标准品(批号150600-200707，规格lO 000 EU，中国药品生物制品检定所)。
1.3仪器
WRY-2000型微机热原测温仪(上海达亿)；试验用注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，均经250℃加热30 rain以上除去热原。2方法与结果
本实验参照中国药典热原检查法的规定，取健康新西兰家兔，体重1.7～3.0 kg，按热原检查法挑选。固定箱内固定家兔1h后，每隔30 rain测1次肛温，2次体温之差不得超过0，2℃，以2次体温的均值(均温)作为该兔的正常体温(0时体温)。取正常体温38.0～39.6℃家兔，按均温随机区组法分成模型组和药物组，每组5只，每次实验均重新进行模型组。测定模型组、药物组正常体温15 rain之内，分别向2组家兔股四头肌注射生理盐水、供试品0.8 mL／kg，并自耳缘静脉注射15 EU／mL细菌内毒素溶液1 mL&g，注射后每隔30 min测量1次肛温，共记录6次。
统计学处理采用组间比较t检验。家兔注射细菌内毒素后，体温明显升高，与对照组相同时间点比较，药物组家兔体温低于对照组，且部分时间点有统计学意义。比较了2组家兔与注射内毒素前的体温升高值。结果显示，药物组家兔升温值低于对照组，且部分结果有统计学意义。本实验初期设阳性对照组，采用肌内注射复方氨林巴比妥注射液，可有效地抑制家兔发热反应，考虑到检验方法的普及，正式实验时不设阳性对照药物。3讨论
近年国家非常关注提高中药注射剂的质量标准，启动了中药注射剂安全性评价、提高标准等行动，从生产、临床、监督检验等多方面监督，但从生产检验层面监督中药注射剂的有效性尚无有效措施。2010年版中国药典收载了《中药生物活性测定指导原则》，这是保障中药注射剂安全有效、质量可靠的重要举措之一。
银黄注射液收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，是由金银花提取物和黄芩苷组成，有清热、解毒、利咽之功效，临床用于风热犯肺所致发热、咳嗽、咽痛等症，上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽炎等见上述症候者，临床疗效可靠。其质量标准中收载了测定绿原酸和黄芩苷的含量。清热是银黄注射液主要功效之一，其主要原药材金银花、黄芩也具有解热作用。大量文献研究了黄芩及黄芩苷、金银花及绿原酸的解热作用及其机制。我们选择解热作用评价银黄注射液的生物活性是有代表性的指标。
内毒素是人类最重要的致热原之一，发热是内毒素的主要生物活性。临床上发热是急性感染性疾病最常见的症状，也是中医温病的最重要见证，因此我们选用内毒素作为致热原研究银黄注射液的解热作用。采用细菌内毒素国家标准品制作模型，实验结果显示，家兔发热模型制作成功，且高温持续时间较长。细菌内毒素所致模型方法成熟、稳定、重现性好、方法可操作性强。缺点为采用家兔评价药物活性成本较高，在药品生产单位普及可能增加企业生产成本。
实验结果表明，家兔耳缘静脉注射细菌内毒素可以引起稳定的发热反应，与文献报道一致，内毒素所致家兔发热高峰一般在注射内毒素后1～2 h，因此制定标准时考虑将注射后1 h、1.5 h、2 h作为评价药物活性的主要时间点。肌内注射银黄注射液可对抗细菌内毒素所致家兔发热反应，且此作用可在同一批样品不同次实验重现，也可在不同批次的样品或不同厂家样品中体现，但由于样品收集等原因，需要更多批次的重复。药物的解热作用可以通过体温直接比较，也可以通过比较升温值反应，根据本次实验结果，采用后者更易反映应药物作用，但也有标准差较大的缺点，实际工作中应具体分析采用。
参考文献
[1]中国药典2010年版(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：132-133.
[2]中国药典2010年版(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：75―76.