【摘要】 目的 建立测定血府逐瘀丸中芍药苷含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-冰醋酸-水（16∶1∶84），检测波长为230 nm，流速1.0 mL/min，柱温27℃。结果 芍药苷进样量在0.1772~0.886μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 8），平均加样回收率为98.40%，RSD=0.59%（n=6）。结论 此法重复性好、专属性强，可用于血府逐瘀丸的质量控制。?
【关键词】 血府逐瘀丸；芍药苷；色谱法，高效液相?
【中国分类号】 R69.18【文献标识码】 B【文章编号】 1044-5511（2012）02-0133-01??
血府逐瘀丸处方收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第一册，由柴胡、当归、赤芍和红花等十一味药组成。具有活血祛瘀，行气止痛的功效，主要用于治疗瘀血内阻，头痛或胸痛，内热瞀闷，失眠多梦，心悸怔忡，急躁善怒［1］。由于该质量标准无含量测定项，为有效控制其内在质量，本实验采用高效液相色谱法对芍药苷的含量测定方法进行了研究，结果表明该方法操作简单、准确可靠，重复性好。?
1 仪器和试药?
LC-10ATVP型高效液相色谱仪（日本岛津），包括SPD-10AVP紫外检测器，浙江大学N2000色谱数据工作站；UV2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津）；BP211D型电子天平（德国赛多利斯）；LQH2000超声波清洗器(上海科导仪器有限公司)。甲醇为色谱纯，水为重纯化水，其余试剂均为分析纯。芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-201035）；血府逐瘀丸（药都制药集团股份有限公司，规格：9g/丸；批号分别为110401,110402,110403）。?
2 方法与结果?
2.1 色谱条件:色谱柱：DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流动相：乙腈-冰醋酸-水（16∶1∶84）；流速1.0 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：27℃；进样量10μL。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2500。?
2.2 溶液的制备:取重量差异项下的本品，剪碎，取约9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。称取芍药苷对照品0.01436g，置于100mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置于10mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。?
2.3 方法学考察:(1) 阴性对照试验：按处方量制备缺赤芍阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取供试品、对照品、阴性对照品溶液，依法进样。色谱图见图1，可见阴性样品不干扰芍药苷的测定。?
?
A BC?
A.对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性对照品溶液?
图1 高效液相色谱图?
(2) 线性关系考察：称取芍药苷对照品0.01772g，置于100mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液1，2，3，4，5mL，分别置于10mL量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10μL。以进样量（μg）为横坐标（X），芍药苷峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.09×106X-2.65×104（r=0.999 8）。结果表明，芍药苷进样量在0.1772~0.886μg之间与峰面积线性关系良好。(3) 精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次。结果峰面积的RSD=0.28%（n=5），表明仪器精密度良好。(4)重复性试验：精密称取同一批样品5份，按样品含量测定方法测定，结果芍药苷含量的RSD=0.75%（n=5），表明方法重现性良好。(5) 稳定性试验：取"2.3.4"项下1号供试品溶液，每2h进样1次，每次进样10μL，连续进样7次，结果RSD为0.83%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。(6)加样回收率试验：精密称取已知含量（4.09mg/丸）的样品6份，各4.5g，称取芍药苷对照品0.00517g，置于10mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密加入此溶液（0.517mg/mL）4mL，再按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定并计算回收率。结果见表1 。?
表1 芍药苷加样回收率实验结果?
?
2.4 样品测定: 依法对3批中试产品的芍药苷含量进行了测定，结果批号为110401,110402,110403的样品中芍药苷含量分别为4.09, 4.15, 4.10 mg/丸。?
3 讨论?
3.1 波长的选择:采用紫外-可见分光光度计对芍药苷对照品溶液在200～400nm波长范围扫描，结果对照品溶液在230nm波长处有最大吸收，因此确定230nm为检测波长。?
3.2 提取溶剂的选择:根据芍药苷的化学性质，分别以50%甲醇和70%乙醇为溶媒，对血府逐瘀丸中赤芍的有效成分芍药苷进行提取研究，结果表明2种溶媒的提取效率基本相同，鉴于70%乙醇提取供试品溶液中其他组分较多，易污染色谱柱，故采用50%甲醇为提取溶剂。?
3.3 流动相的选择:实验曾以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（40:65）［2］、乙腈-水（15:85）［3］和甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（67:173:4:4）［4］为流动相进行试验研究，结果样品未达到满意的分离效果。?
本研究结果显示，该实验方法准确、快速、重复性好、精密度高，阴性无干扰，可作为血府逐瘀丸的质量控制方法。??
参考文献?
［1］ 卫生部药品标准 中药成方制剂（第一册）［S］. WS3-B-0071-89：72.?
［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：147.?
［3］ 谢浙裕，钟宁远，柴军.高效液相色谱法测定活血通脉片中芍药苷含量［J］.海峡药学，2010,22（3）：46-47.?
［4］ 贾传弟.高效液相色谱法测定败酱草片中芍药苷的含量测定［J］.中医药临床杂志，2010,22（4）：342-344.