【摘要】 目的:研究中药复方补阳壮骨提取物对雌性造模大鼠（切除双侧卵巢）骨密度及骨小梁的影响。方法:手术切除雌性SD大鼠双侧卵巢造模，手术后1个月开始给药，连续灌胃补阳壮骨提取物4个月；采用DEXA法测定大鼠全身骨密度、腰椎骨密度、双侧股骨颈骨密度以及双侧股骨骨密度；取第2-4腰椎切片、HE染色后观察测定骨小梁形态。结果:在影响各部位骨密度方面，补阳壮骨方高、中、低剂量组均高于模型组，其中中剂量组腰椎骨密度与模型组相比有显著差异（P［1］，补阳壮骨方可一定程度上防止自然衰老引起的骨密度下降；能改善自然衰老引起的骨小梁结构退化，实验表明该方对于更年期的骨质疏松症具有一定功效。但是该方的作用机理有待深入发掘。关于中药复方的机理复杂，一般具有间接和直接作用于靶细胞的作用。Hong Zhang［2］等发现中药复方二至丸对成骨细胞和破骨细胞直接作用；Nian H［3］等研究发现，二仙汤提高卵巢切除大鼠的血浆雌二醇浓度，降低血浆中的ALP水平，增加卵巢的重量等。对鉴于该方的作用机理尚未明确，需要进一步探索性研究。因此，本实验针对补阳壮骨方的功能主治，研究其对雌性切除卵巢大鼠骨密度及骨小梁的影响，为阐明其作用机理提高依据。现将结果报道如下。?
1 试验材料 ?
1.1药物 :补阳壮骨方提取物：广州中医药大学新药开发研究中心提供，批号20071201。提取物1g约相当于原生药3.9g，阴凉干燥条件下密闭保存。右归丸：河南省宛西制药股份有限公司生产，批号071004。?
1.2动物 :SD大鼠，雌性，SPF级，由广东省实验动物中心提供，合格证：SCXK（粤）2003-0001。?
1.3仪器:骨密度测量仪：美国GE公司生产，型号Lunar Prodigy；全自动石蜡切片机:德国徕卡公司生产,型号KM2255；全自动生物组织脱水机：德国徕卡公司生产,型号TP1020；石蜡包埋机：德国徕卡公司生产,型号EG1140；全自动染色机：德国徕卡公司生产,型号5010；生物显微镜：日本奥林巴斯生产，型号BX50；漂烘片机：中国雅博公司，型号YABO200；医学图象分析管理系统：中国北航公司生产，型号：MIAS?
2 试验方法?
2.1 动物来源及分组?
(1)动物来源 :正常SD大鼠，雌性，体重180±20g，SPF级，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证：0031701。 ?
(2)动物分组:取正常SD大鼠80只，经适应性喂养后造模，造模一周后按体重随机分为空白组、模型组、阳性组、补阳壮骨方高、中、低剂量组。?
2.2造模方法:除空白组外，各组均施行经腹部双侧卵巢切除手术，空白组施行假手术。?
2.3 给药剂量的确定:根据补阳壮骨方服用剂量和预试验结果确定，本试验中补阳壮骨方提取物的低、中、高三个剂量组(按体重计算)分别相当于成人临床用量的5、10、20倍，按生药计算剂量分别为0.55、1.1、2.2g生药/kg，按提取物计算剂量分别为141，282，564mg提取物/kg，（用于药效试验的产品为批号20071201的中试产品，未压片，尚有部分辅料未添加）分别加蒸馏水配成0.055、0.11、0.22g生药/mL，相当于14.1、28.2、56.4mg提取物/mL的混悬液，超声分散，使用前摇匀。倍美力片按相当于成人临床用量的10倍计算，剂量为104.2μg/kg/d，加蒸馏水配成10.42μg/mL的混悬液，超声分散，使用前摇匀。?
2.4 给药方法: 灌胃给药，1mL/100g体重，每日1次，空白组和模型组给予等体积蒸馏水，其余各组给予相应供试品。切卵巢模型术后恢复1.5个月后开始给药，连续给药4个月，末次给药后动物禁食12h。?
2.5 检测指标?
(1) 骨密度（BMD）测定：麻醉后采用DEXA法测定大鼠全身骨密度、腰椎骨密度、双侧股骨颈骨密度以及双侧股骨骨密度。?
(2) 骨小梁面积、骨小梁面积率的测定及骨小梁计数：取2-4腰椎，10%甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，用图像分析软件测定骨小梁面积及骨小梁面积率；每片随机观察椎体三个视野（放大10倍），计算视野内骨小梁个数，取平均值。?
3 试验结果?
表1-1 补阳壮骨方提取物对切除双侧卵巢模型大鼠骨密度（BMD）的影响（x?-±s） 单位：g/cm?2??
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注：与模型组比较 * p［4］，常见于50岁以上的老年人，且女性由于峰骨量较低及绝经后的雌激素水平降低，发病率是男性的3倍［5］。目前有越来越多的合成药物用于预防和治疗骨质疏松。但是，其中很大一部分具有副作用，例如高血钙、高钙尿，增加子宫癌和乳腺癌的风险，乳房触痛，阴道出血和热潮红等［6-8］。?
中医对骨质疏松辨证多以补肾为主，分阴阳为纲。临床上主要常见证型主要分为肾阳虚、肾阴虚两种，治疗上以温补肾阳、滋补肝肾、填精生髓、强壮筋骨为主。根据上述特点，本实验选取雌性切除卵巢大鼠作为试验对象，研究了补阳壮骨方对雌性切除卵巢大鼠骨密度及骨小梁的影响。结果表明，补阳壮骨方可在一定程度上缓解雌性衰老大鼠的骨密度下降以及骨小梁的退变。提示补阳壮骨方对防治老年骨质疏松有一定作用。?
现代医学研究发现，补阳壮骨方中的主要成分淫羊藿、黄芪可防治因肾上腺皮质激素所致的肾阳虚等不良反应。李青南等［3］进行了淫羊藿提取液对糖皮质激素所致骨质疏松大鼠的骨形态计量学分析，发现淫羊藿提取液能抑制骨吸收，促进骨形成。谢华等［4］用黄芪水提液可促进骨形成、抑制骨吸收，有效防治激素继发性骨质疏松。结合前期研究的结果［1］，补阳壮骨方防止雌性切除卵巢大鼠骨密度降低及缓解骨小梁退变的机制具有间接和直接作用。前面研究表明该方可能通过调节下丘脑-垂体-性腺轴功能，促进性激素作用（本课题相关论文待发表）同时调节体内钙平衡来实现。该去势动物模型实验实验结果，补充说明其作用机理为对骨细胞的直接作用。为进一步阐明其机理，可研究补阳壮骨方对破骨细胞、成骨细胞的影响，目前试验正在进行。本研究为阐明中药复方治疗的整体概念提高实验依据。??
参考文献?
［1］ 刘亮锋，赖平，唐立海. 补阳壮骨方对雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影响［J］.中国药房 2010 21（39）：3671-3673?
［2］ Hong Zhang,Wei-Wei Xinga,, Yu-Shan Li . Effects of a traditional Chinese herbal preparation on osteoblasts and osteoclasts J Maturitas 2008 61:334-339?
［3］ Nian H, Qin LP, Zhang QY. Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats. J Ethnopharmacol. 2006 Nov 3;108(1):96-102.?
［4］ Consensus development conference:Prophylaxis and treatment of osteo-porosis［C］.Am J Med 1993,94:640～650?
［5］ 郭世绂.骨质疏松基础与临床［M］.天津科学技术出版社 2001 1.?
［6］ Genant HK, Bay linkDJ, Gallagher JC. Estrogens in the prevention of osteoporosis in post menopausal women. Am J Obstet Gynecol 1998;161:1842-6.?
［7］ Bennet AE, Wahner HW, Riggs BL. Soya-a dietary source of the non steroidal oestrogen equal in man and animals. J Endocrinol 1984;102:49-56.?
［8］ Canalis H, McCarthy T, Centrella M. Growth factors and the regulation on bone remodeling. J Clin Invest 1998;81:277-81.?
［9］ 李青南，廖进民，吴铁等.淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨质疏松的实验研究［J］.中国药学杂志 1996，31(8):467～470.?
［10］ 谢华，吴铁，黄连芳等.黄芪水提液对大鼠的类固醇性骨质疏松的防治作用［J］.中草药，1997，28(1):25.