血球计数板是一种常见的计数工具。在高中生物学中，血球计数板被用于实验“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”中酵母菌数量的计数。 ■ 一、 高考真题 ■ 1. （2008年江苏省高考第31题）（4） 在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是_________和_________。
（5） 实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是_________。
■ 解析 试题的设计从血球计数板的实验方法入手，需要对实验操作的正误进行判断。静置的培养液中酵母菌可能沉淀到培养瓶下部。若取样时取的是原液底部，则统计出的数据可能偏大，取的是原液上部时，统计处的数据将偏小，因此取样前需摇匀。清洗计数板时，先用洗液浸泡，再用清水冲洗，在冲洗时切忌擦计数室，以免磨损计数室网格。
■ 答案 （4） 摇匀培养液后再取样
培养后期的样液稀释后再计数 （5） 浸泡和冲洗
由以上可知，近年的高考题着重于对血球计数板使用目的、使用的步骤以及计数时的注意事项的考查，对计数过程中涉及的计算并未涉及，因此下面对高考真题中涉及的考点进行分析总结，并对未涉及的具体计算问题进行了介绍，
■ 二、 血球计数板构造
血球计数板是一块较厚的特制玻片，其玻片中有四条凹槽，构成三个平台。中间的平台较宽，且又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网（图1）。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室（图2）。这一大方格的长和宽各为1 mm，深度为0.1 mm（盖上盖玻片后计数室的高），其容积为0.1 mm3，每个大方格分25个中格，每个中格又分为16个小方格（25×16型）如图3，或每个大方格分16个中格，每个中格又分为25个小方格（16×25型），共400个小格。
■ 例1 有关“探究培养液中酵母菌数量动态变化”的实验，正确的叙述是（ ）
A. 改变培养液的pH不影响K值（环境容纳量）大小
B. 用样方法调查玻璃容器中酵母数量的变化
C. 取适量培养液滴于普通载玻片后对酵母菌进行计数
D. 营养条件并非影响酵母菌种群数量变化的唯一因素
■ 解析 养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素，pH变化将影响酵母菌的生长。对酵母菌计数时应该用血球计数板，为样方法。酵母菌体积小，计数时需在显微镜下进行，因此玻璃容器内的酵母菌数量不宜直接观察。
■ 答案 D
■ 四、 计数原则
（1） 如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。
（2） 活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
（3） 对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“计上不计下，计左不计右”的原则，另两边不计数。计数时，如果使用16×25规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数（如图4中黑色部分）；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格）的酵母菌数（如图5黑色部分）。
16×25型的计数板中酵母细胞个数/1 mL=100个小方格细胞总数/100×400×10 000×稀释倍数；25×16型的计数板中酵母细胞个数/1 mL＝80个小方格细胞总数/80×400×10 000×稀释倍数。
■ 例2 下图为不同培养阶段酵母菌种群数量、葡萄糖浓度和乙醇浓度的变化曲线，请回答下列问题：某同学在T3时取样，统计的酵母菌种群数量明显高于D对应的数量，原因可能有_______、_______和用血球计数板计数时出现错误等。
■ 解析 取样前培养液是否摇匀会影响酵母菌的计数。从曲线看，在T2~T3时，酵母菌数量下降，表明培养液中有死酵母菌存在，用血球计数板进行计数时死亡酵母菌也统计在内，而种群数量统计的是存活的个体数，因此种群数量偏高。对此可以用采用活体染色法，如美蓝，当它处于氧化状态时呈现出蓝色，而还原态时为无色，故活细胞表现出无色；而死细胞呈蓝色或者淡蓝色。
■ 答案 取样时培养液未摇匀，从底部取样 未染色，统计的菌体数包含了死亡的菌体
■ 巩固训练
1. 通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1 mm×0.1 mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先稀释后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10 mL该培养液中酵母菌总数有________个。
2. 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0.1 mm3。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻________个/mL。
答案 1. 稀释 2×108 2. 5n×105