生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定

一、         可溶性还原性糖的鉴定原理

生物组织中的可溶性糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的还原性的半缩醛羟基，叫做还原性糖；蔗糖的分子内游离的半缩醛羟基，叫做非还原性糖，不具还原性。守丧本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原性糖与否，而坚定可溶性的非还原性糖。斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡兰色的Cu（OH）2沉淀。Cu（OH）2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：

  CH2OH—（CHOH）4—CHO+2Cu（OH）2→

CH2OH—（CHOH）4—COOH+Cu2O↓+2H2O

用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色过程为：

浅兰色→棕色→砖红色↓

二、         蛋白质的鉴定原理

  鉴定生物组织中含有蛋白质是常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲的成分是质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液。在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC—NH—CONH2）能与Cu2+作用，紫色或紫红色的络合物，反应叫做双缩脲反应。蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的肽键，，蛋白质都可与双缩脲试剂颜色反应。

斐林试剂的配置

甲液  质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液

乙液  质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液

使用时临时配置，将45滴乙液滴入2mL甲液中，配置后立即使用。

苏丹Ⅲ溶液的配置

称取0.1g苏丹Ⅲ干粉，溶于100mL酒精的体积分数为95%溶液中，待溶解后再使用。

苏丹Ⅳ溶液的配置

称取0.1g苏丹Ⅳ干粉，溶于50mL丙酮中，再加入体积分数为70%的酒精50mL，混合后即可使用。

双缩脲试剂的配置

取10g氢氧化钠放入量筒只能感，加水至100mL，待溶解后倒入试剂瓶中，配置成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化纳溶液，瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂 A。

取1g硫酸铜放入量筒中，加水至100mL，待溶解后倒入试剂瓶中，配成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液（兰色）。瓶口上塞上胶塞，贴上标签，写上试剂B。