【摘要】 目的 探讨丹红注射液预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法 雄性SD大鼠24只。大鼠心脏离体后悬于Langendorff灌流装置。随机分为3组,每组8只：缺血组(ISCH组)：大鼠心脏离体平衡50 min，37℃缺血45 min，K?H液复灌3 h；低浓度丹红注射液预处理组(L?prec组)：大鼠心脏平衡20 min，以含低浓度丹红注射液(5 mg/L)的灌注液灌注15 min，洗脱15 min，37℃缺血45 min，K?H液复灌3 h；高浓度丹红注射液预处理组(H?prec组)：大鼠心脏平衡20 min，以含高浓度丹红注射液(15 mg/L)的灌注液灌注15 min，洗脱15 min，37℃缺血45 min，K?H液复灌3 h。平衡50 min和复灌2 h 期间连续监测LVDP，LVDEP，±dp/dtmax。复灌60 min时接取冠脉流出液，测定冠脉流出液中CK和LDH的含量。复灌结束，将心脏切片(1～2 mm)并做TTC染色。结果 机械功能：基础状态时3组LVDP，LVDEP，±dp/dtmax两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。复灌期间L?prec组的LVDP，LVDEP，±dp/dtmax与ISCH组相比，差异无统计学意义。H?prec组的LVDP和±dp/dtmax与ISCH组相比，显著升高(P0.05)。结论 丹红注射液预处理能减轻心肌缺血再灌注损伤后CK和LDH 的释放，缩小心梗面积；高浓度丹红注射液预处理能显著增强心脏缺血再灌注损伤后心脏的机械功能。?
【关键词】丹红注射液；预处理；缺血再灌注损伤
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Danhong Injection protects against myocardial reperfusion injury in isolated rat heart WANG Cong?zhen,CAI Shu?fang.Third Clinical Hospital of Weifang Medical Unirersity,Weifang 262500,China
【Abstract】 Objective
This study investigated whether Danhong Injection could protect perfused hearts of rats against ischemia/reperfusion injury (IR) when it was administered before the adverse ischemic event. Methods Studies were conducted in buffer?perfused isolated rat hearts. This experiment consisted of baseline perfusion for 20 min, warm global ischemia for 40 min and 2 hours of reperfusion.Preconditioning of hearts in L?prec and H?prec group was induced by 15 min of low(5 mg/L) or high(15 mg/L) concentration of Danhong Injection followed by 15 min of wash out. Untreated hearts served as ischemic control (ISCH) group. Left ventricular mechanical function (LVDEP, LVDP, ±dp/dtmax), cardiac enzyme activity(CK, LDH), and infarct size (IS) were measured as variables of ventricular function and cellular injury, respectively. Results Danhong Injection preconditioning attenuated the release of CK and LDH and reduced the IS of the heart during reperfusion, compared with ISCH group(P［1,2］。但应用丹红注射液进行预处理对于心肌缺血再灌注损伤的保护作用国内外尚未见报道。因此, 我们利用大鼠离体灌流模型，研究丹红注射液预处理对心脏发生37℃缺血40 min后复灌期间的心脏机械功能，心肌酶的释放和心梗面积的影响，从而探讨丹红注射液治疗心脏的缺血再灌注损伤的有效方法。?
1 材料和方法?
1.1 实验材料 普通级SD大鼠24只(四川省医学科学院实验动物研究所，合格证号：SCXK 川2004?15)，雄性, 体质量200～300 g。丹红注射液(10 ml/支,山东菏泽步长制药有限公司生产,批号050110)。Powerlab Chart 5 多通道生理记录仪(AD Instruments, Australia), Image?Pro?Plus 5 图像分析软件(America)。AU?400全自动生化分析仪(日本Mishima公司)。?
1.2 Langendorff 离体心脏灌流模型 雄性大鼠(200～300 g)戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔麻醉，并用肝素(500 U/ 只)进行肝素化。心脏离体后，悬挂于Langendorff 装置，经主动脉对心脏进行逆行灌注。心脏复跳后，剪开肺动脉，以有利于肺动脉液体回流。待心脏稳定后，经左心耳剪开一小口，轻柔插入连接有压力传感器的水囊，调节LVEDP 5~7 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa), 多通道生理记录仪(Powerlab chart5, AD Instruments, Australia)连续监测左室机械功能，包括LVDP，LVDEP，±dp/dtmax。?
K?H液的成分(mmol/L)为：NaC1 118.4，KCl 4.7，M gSO41.1.KH??2?PO??4?1.18，NaHCO??3?24.5，CaCl??2?2.55，Glucose11.1，pH 7.4 K?H液充以95％O??2?和5％CO??2?的混台气体。?
1.3 实验分组 24只雄性SD 大鼠随机分为3组,每组8只：缺血组(ISCH组)：大鼠心脏离体平衡50 min，37℃缺血45 min，K?H液复灌3 h；低浓度丹红注射液预处理组(L?prec组)：大鼠心脏平衡20 min，以含丹红注射液5 mg/L的灌注液灌注15 min，洗脱15 min，37℃缺血45 min，K?H液复灌3 h；高浓度丹红注射液预处理组(H?prec组)：大鼠心脏平衡20 min，以含丹红注射液15 mg/L的灌注液灌注15 min，洗脱15 min，37℃缺血45 min，K?H液复灌3 h。?
1.4 监测指标 连续监测基础状态50 min和复灌2 h期间大鼠心脏的机械功能。包括：LVDP，LVDEP，±dp/dtmax。复灌60 min时点接取冠脉流出液测定CK和LDH的含量。复灌结束后心脏速冻后，行TTC(1% TTC，37℃ 20 min)染色，心脏切片用4%多聚甲醛固24 h。用扫描仪扫描心脏切片。用Image?pro plus 5 software 分析心梗区域占心脏总面积百分比。?
1.5 统计学方法 数据均以(x±s)表示。各组心脏机械功能和酶学之间的比较用重复测量的方差分析，两两之间的比较用Bonferroni 分析。心脏基础状态和复灌期间机械功能的比较采用多元方差分析。心梗面积的比较用单因素方差分析。P0.05)。复灌期间L?prec组的LVDP，LVDEP，±dp/dtmax与ISCH组相比，差异无统计学意义。H?prec组的LVDP和±dp/dtmax与ISCH组相比，显著升高(P0.05)；L?prec组和H?prec组的心梗面积与ISCH 组相比，显著降低(P0.05)(表2)。?
表1
丹红注射液预处理对心肌缺血再灌注后心脏机械功能的影响(x±s,n=8)
组别基础值再灌10 min再灌30 min再灌60 min再灌90 min再灌120 min
LVDP
ISCH121±1155±9??*?49±8??*?43±7??*?37±8??*?25±8??*?
L?prec129±1253±7??*?51±6??*?49±8??*?43±6??*?38±7??*?
H?prec126±1076±10??*#▲?90±8??*#▲?81±11??*#▲?70±10??*#▲?67±9??*#▲?
LVDEP
ISCH5.7±1.086±18??*?65±19??*?53±21??*?56±23??*?47±23??*?
L?prec3.5±1.279±13??*?58±13??*?50±18??*?49±21??*?46±23??*?
H?prec4.2±0.923±12??*#▲?15±13??*#▲?16±19??*#▲?17±12??*#▲?14±11??*#▲?
+dp/dt??max?
ISCH3190±4402326±352??*?2170±458??*?2431±460??*?2321±250??*?2138±312??*?
L?prec3370±6002583±379??*?2370±341??*?2258±343??*?2398±241??*?2210±330??*?
H?prec3510±2353060±246??*#▲?2998±390??*#▲?3105±399??*#▲?2980±358??*#▲?2990±331??*#▲?
?dp/dt??max?
ISCH2913±3801980±245??*?2051±231??*?2178±198??*?2283±311??*?2391±223??*?
L?prec2835±2412139±198??*?2098±250??*?2293±158??*?2081±169??*?2259±309??*?
H?prec2950±2592431±329??*#▲?2593±313??*#▲?2631±197??*#▲?2458±253??*#▲?2398±209??*#▲?
注：与基础值比较，?*P［3］。但临床上IPC具体实施存在潜在危险因素而难以得到应用，近来发现药物预处理能起到与IPC相类似的临床作用，西药作用肯定，但毒副作用多。中药毒副作用小，对心肌缺血的治疗有其独特性，近年有不少学者对中药预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用进行了一系列研究与探索，取得了较好效果［4,5］。?
本研究发现，大鼠心肌缺血再灌注期间，心脏机械功能显著下降，冠脉流出液中CK和LDH显著增加，表明37℃缺血40 min, 心脏发生了再灌注损伤。我们实验中利用大鼠心脏灌流模型，研究发现与缺血组相比，丹红注射液预处理可明显减轻复灌60 min时 CK 和LDH的释放和减小心梗面积。高浓度丹红注射液预处理可显著改善左室机械功能，表现为显著增加LVDP 和dp/dtmax，而相应减少LVDEP和dp/dtmin。表明高浓度丹红注射液预处理显著增加左室的顺应性。高浓度丹红注射液预处理则不仅减少CK和LDH的释放和减小心梗面积，而且显著增强左室机械功能，表明高浓度丹红注射液预处理发挥保护作用更确切，更有临床价值。?
中药预处理模拟IPC的机制是多因素综合调控发挥作用，单味药物预处理的实验证明，预处理是通过多途径、多个靶点的调控保护［6?8］。但是单味药或有效成分仅能启动一至二个保护途径，复方制剂是中药的优势和特色，可兼顾这种多因素的特点，探索组方合理的复方制剂用于临床似乎更符合目前对IPC内源性保护机制的多因素综合调控作用的认识。丹红注射液为丹参、红花按科学配方提取的复方制剂，主要成分有丹参酮、丹参酸、丹参酚酸、红花红色素、红花酚甙和儿茶酚花等成分。两药相加提取更能活血化瘀、通络止痛、保护血管内皮、促进血管再生、抗血凝等作用［9］。中医药典籍对丹参、红花两味药的功效多有描述，丹参性微寒若辅以红花，则可使其温性以助消散瘀血，温运血行，共奏活血通络、祛瘀生新之功。因此，从丹红注射液全方看，丹参为主药，红花为辅药，一温一寒，一升一降，活血兼具养血之功，而组方严谨。?
总之，我们的研究表明丹红注射液预处理对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用。这提示丹红注射液在治疗心脏的缺血再灌注损伤可能具有潜在的价值。但随着对IPC机制的进一步了解，我们还需要进一步从细胞水平、分子水平阐明预处理保护机制以及在其他物种是否也存在着这种保护作用。?
参 考 文 献?
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［5］ 顾国嵘,黄培志,黄朝阳,等.血塞通预处理对心肌缺血再灌注损伤的早期保护作用.中国急救医学,2005,25(4):264?265.?
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［8］ 高伟,梁日欣,肖永庆,等.川芎内酯A预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注所致血管内皮细胞胞损伤的保护作用.中国中药杂志,2005,30 (18):1448?1451.?
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